نقش حفاظتي سيليمارين و فلاونوئيد‌هاي آرتيشو (Cynara scolymus) در مقابل آپوپتوزيس نورون‌هاي حركتي قطعات كشت شده نخاع موش‌هاي سوري بالغ

Protective effect of silymarin and Artichoke (Cynara scolymus) flavonoids against apoptosis of cultured spinal cord the motor neurons of adult mice

مقدمه: مرگ نورون هاي حركتي در كشت قطعات نخاع از نوع آپوپتوزيس مي باشد و استرس اكسيداتيو مي‌تواند يكي از مكانيسم هاي دخيل در اين پديده محسوب شود. سيليمارين به عنوان يك آنتي‌اكسيدان قوي قادر است استرس اكسيداتيو را مهار نمايد. با توجه به اينكه فلاونوئيدهاي آرتيشو منبع غني از سيليمارين مي‌باشند هدف از اين پژوهش بررسي اثر سيليمارين و فلاونوئيدهاي آرتيشو بر آپوپتوزيس نورونهاي حركتي قطعات كشت شده نخاع موش بود. روش­‌ها: نخاع سينه اي موش هاي سوري ماده بالغ به قطعات 500 ميكروني بريده و اين قطعات به 4 گروه تقسيم شدند: 1- قطعات لحظه صفر كه بلافاصله فيكس شدند. 2- قطعات گروه كنترل كه حلال سيليمارين و فلاونوئيدها را دريافت كردند. 3- قطعات تيمار شده با سيليمارين (200 ميكرو مولار) 4- قطعات تيمار شده با فلاونوئيدهاي استخراج شده از آرتيشو (10 ميكروگرم بر ميلي ليتر). قطعات گروه 2 تا 4 به مدت 6 ساعت در محيط كشت نگهداري شدند. سپس قطعات كشت شده فيكس و پس از شستشو برش گيري شدند. جهت بررسي جنبه‌هاي مورفولوژيكي آپوپتوزيس از رنگ آميزي هوخست و پروپيديوم آيودايد استفاده شد. جهت ارزيابي پراكسيداسيون ليپيد و ظرفيت كل آنتي اكسيداني در قطعات نخاع به ترتيب از سنجش مالون دي آلدهيد (MDA) و قدرت آنتي اكسيداني/ احيا كنندگي آهن سه ظرفيتي (FRAP)استفاده شد. يافته‌ها: نورون هاي حركتي قطعات نخاع كشت شده براي به مدت 6 ساعت مشخصات مورفولوژيكي آپوپتوزيس شامل چروكيدگي سلول، متراكم شدن هسته و كروماتين را در مقايسه با نورونهاي لحظه صفر نشان دادند. در اين زمان، ميزان MDA و FRAP در قطعات نخاع نسبت به قطعات لحظه صفر به ترتيب افزايش و كاهش يافت. استفاده از سيليمارين و فلاونوئيدهاي آرتيشو به‌طور جداگانه پس از 6 ساعت، نسبت به گروه كنترل، توانست جنبه هاي مورفولوژيكي آپوپتوزيس را در نورون هاي حركتي به تأخير بيندازند و ميزان MDA قطعات نخاع را كاهش دهد. نتيجه­ گيري: سيليمارين و فلاونوئيدهاي آرتيشو با خاصيت آنتي‌اكسيداني خود توانستند آپوپتوزيس نورون هاي حركتي قطعات كشت شده نخاع موش هاي بالغ را مهار نمايند.

Introduction: Motor neurons in cultured spinal cord slices die through apoptosis and oxidative stress might be one of the contributing mechanisms in this process. Silymarin is a potent antioxidant and is able to inhibit oxidative stress. Artichoke flavonoids are a rich source of silymarin. The aim of this study was to investigate the effect of silymarin and artichoke flavonoids on apoptosis of motor neurons in cultured slices of mice spinal cord. Methods: The thoracic region of spinal cord from female adult mice was cut into 500 µm slices. The slices were divided into four groups: 1) slices at time 0 that were fixed immediately, 2) control slices that received solvent of silymarin and flavonoids, 3) Slices that were treated with silymarin (200 µM), 4) Slices that were treated with flavonoids of artichoke (10 µg/mL). The slices of groups 2-4 were cultured for 6 h, fixed and sectioned using a cryostat. To study morphological features of apoptosis, the sections were stained with Hoechst and propidium iodide. Malondialdehyde (MDA) as lipid peroxidation index and ferric reducing ability as a measure of antioxidant power (FRAP) were measured in the spinal cord slices. Results: Spinal motor neurons cultured for 6 h, showed morphological features of apoptosis including cell shrinkage as well as nuclear and chromatin condensation compared to the time 0. MDA level increased and FRAP decreased in the spinal cord slices. Silymarin and artichoke flavonoids delayed apoptosis in the motor neurons and decrease the amount of MDA in the spinal cord slices compared to control. Conclusion: Silymarin and artichoke flavonoids delay apoptosis of motor neurons in cultured spinal cord slices of adult mice.