استخراج مولكول هاي اسيد ريبونوكلئيك با كيفيت بالا از مغز موش صحرايي با استفاده از يك روش ارزان قيمت

Extraction of high quality ribonucleic acid molecules from the rat brain by means of an inexpensive method

زمينه و هدف: استخراج مولكول هاي اسيد ريبونوكلئيك (RNA) با كيفيت بالا از بافت هاي داراي چربي فراوان مثل مغز يكي از چالش هاي جدي محققين علوم اعصاب به شمار مي رود. به اين منظور كيت هاي تجاري گران قيمتي توليد شده است كه بسياري از محققين به دليل كمبودهاي منابع مالي قادر به استفاده از آنها نيستند. در اين مقاله ما يك روش ساده و ارزان قيمت را پيشنهاد مي كنيم. روش­‌ها: موش هاي صحرايي نر نژاد ويستار يك ماهه مورد استفاده قرا گرفتند. حيوانات توسط كلروفورم بيهوش شده و سپس هيپوكمپ مغز آن ها خارج گرديد. RNA كل بافت مغز توسط كيت RNX-Plus شركت سيناكلون استخراج شد. كيفيت RNA استخراج شده با تهيه طيف جذبي مولكول با استفاده از اسپكتروفوتومتر نانودراپ و اندازه گيري نسبت هاي جذبي 260/280 و 260/230 ارزيابي شد. يافته­ها: ميانگين وزن هيپوكمپ هاي جدا شده 1/2±60/2 ميلي گرم بود. ميانگين نسبت جذبي 260/280 برابر با 0/02 ± 1/88 و ميانگين نسبت جذبي 260/230 برابر با 0/02 ± 1/9 بود. الكتروفورز ژل آگارز نشان داد كه RNA هاي ريبوزومي 28s و 18s وجود داشته و RNA استخراج شده كيفيت خوبي دارد. همچنين ميانگين غلظت RNA كل استخراج شده از نمونه ها 608 نانوگرم در ميكروليتر بود. نتيجه­‌گيري: نتايج نشان دادند كه با استفاده از روشي ارزان قيمت، امكان استخراج مولكول هاي RNA با كيفيت بالا از بافت مغز امكان پذير است. از اين رو پروتكل ارائه شده در اين مطالعه به محققين نوروبيولوژي مولكولي توصيه مي شود.

Background and aim: Extraction of high quality ribonucleic acid (RNA) molecules from the high fat tissues such as brain has been a great challenge for neuroscience researchers. Expensive kits have been developed to overcome this challenge. However, many researchers are unable to use due to lack of financial resources. In this study a simple and inexpensive method is suggested. Methods: One month old male Wistar rats were anesthetized by chloroform and their hippocampus was removed. Total RNA of the brain tissue was extracted by RNX-Plus solution from Sinaclon Company. The quality of the extracted RNA was evaluated by Nanodrop spectrophotometer and measuring the 260/280 and 260/230 absorbance ratios. Results: The mean weight of the dissected hippocampi was 60.2 ± 1.2 mg. The mean absorbance ratio of 260/280 and that of 260/230 were obtained 1.88±0.02 and 1.9±0.03, respectively. The agarose gel electrophoresis indicated presence of the ribosomal RNAs 28s and 18s and the extracted RNA had a good quality. The mean concentration of the extracted total RNA was 608 ng/μl. Conclusion: The results indicate that it is possible to extract high quality RNA molecules from the brain tissue by an inexpensive method. Therefore, the presented protocol is recommended to molecular neurobiologists.