بررسي اثر غلظت هاي مختلف نانوذرات اكسيدآهن بر بيان ژن p53در سلول هاي بنيادي مشتق شده از غشاي آمنيوتيك انساني

نانوذرات سوپر پارامغناطيس اكسيدآهن، پيشرفت هاي گسترده اي را در نانوتكنولوژي ايجاد كرده است. خصوصيات منحصر به فرد اين ذرات موجب گسترش روزافزون كاربرد آن ها در زمينه هاي مختلف از جمله حوزه هاي پزشكي شده است. يكي از اين كاربرد ها، امكان تجزيه و تحليل غيرتهاجمي براي رديابي سلول ها است. با اين حال، احتمال ايجاد سميت در سلول ها توسط اين نانوذرات گزارش شده است. با توجه به اين كه آسيب سلولي ناشي از نانوذرات اكسيد آهن وابسته به غلظت است، بنابراين پيدا كردن غلظت مناسب نانوذرات اكسيد آهن براي جلوگيري از آسيب سلولي يا مرگ سلولي ناشي از آپوپتوز بسيار مهم است. هدف از اين مطالعه يافتن غلظتي از نانوذرات سوپر پارامغناطيس اكسيدآهن است كه منجر به ايجاد آپوپتوز در سلول ها نشود. اين مطالعه با هدف بررسي اثر غلظت هاي مختلف نانوذره اكسيد آهن بر بقاي سلول، تاثير بر افزايش بيان ژن دخيل در آپوپتوز در سلول هاي بنيادي مزانشيمي مشتق از غشاي آمنيوتيك انسان مورد ارزيابي و بررسي قرار گرفت. ابتدا سلول هاي بنيادي از بافت غشاي آمنيوتيك انساني استخراج و كشت داده شدند و جهت اثبات ويژگي مولتي پوتنت بودن اين سلول ها به رده هاي سلولي چربي، استخواني و غضروفي متمايز شدند. سپس درصد زنده ماني سلول هاي تيمار شده با غلظت هاي مختلف نانوذره اكسيد آهن (200، 150، 100، 50، 0 ميكروگرم در ميلي ليتر) در بازه زماني 24 و 48 ساعت به روش MTT مورد ارزيابي قرار گرفت. سپس اثر غلظت هاي 0، 100،150 و 200 ميكروگرم بر ميلي ليتر از نانوذره بعد از 24 ساعت در hAMSCs از نظر بيان ژن p53 با روش Real-time PCR سنجيده شد. سلول هاي hAMSC استخراج شده در كشت دو بعدي ظاهري دوكي شكل داشتند كه در بررسي ماركرهاي سطحي توسط فلوسايتومتري، مشخص شد كه اين سلول ها CD29، CD90 و CD105 را بيان كرده و در مقابل CD34 و CD45 را قادر به بيان نبودند. نتايج حاصل از بررسي توانايي چند تواني hAMSCs نشان داد كه اين سلول ها قابليت تمايز به رده هاي سلول هاي چربي، استخواني و غضروفي را دارا هستند. نانوذره اكسيد آهن در غلظت 50 و 100 ميكروگرم در ميلي ليتر در مدت زمان 24 ساعت تاثيري معنادار بر بقا سلول ها نداشت. در حالي كه از غلظت 150 به بعد بقا سلولي به شكل قابل ملاحظه اي كاهش يافت (%1.4 ±42، 0.001 P ). نتايج حاصل از آناليز Realtime PCR نشان داد كه بيان ژن p53 ناشي از مواجه سلول با نانوذره با غلظت هاي 150 ميكروگرم در ميلي ليتر (0.1 ±2.4، 0.001 P ) و 200 ميكروگرم در ميلي ليتر (0.11 ±4.1، 0.001 P ) به شكل قابل ملاحظه اي افزايش مي‌يابد. با توجه به نتايج، نانوذرات مورد استفاده در اين مطالعه در غلظت ≤ 100 ميكروگرم در ميلي ليتر براي رديابي سلول ها مناسب هستند.