جداسازي، شناسايي و تعيين هويت مولكولي گونه‌‌‌هاي كريپتوسپوريديوم در اسهال گوساله‌‌‌ها به روش multiplex nestedPCR

زمينه مطالعه: تشخيص گونه­هاي كريپتوسپوريديوم براساس خصوصيات مورفولوژي بسيار محدود بوده و به تنهايي فاقد ارزش تاكسونوميك است، و لذا استفاده از روش­هاي مولكولي اين محدوديت­ها را تا حدودي برطرف مي­سازد. هدف: هدف از اين مطالعه تعيين ژنوتيپ­هاي غالب كريپتوسپوريديوم در گوساله­هاي مبتلا به اسهال بود. روش كار: مطالعه در گوساله‌هاي كمتر از 3 ماه و براي مدت 2 سال انجام شد. در طول دوره مطالعه، 160 نمونه مدفوع از گوساله‌هاي جوان جمع‌آوري شده و ابتدا از طريق ميكروسكوپي و سپس با استفاده از تكنيك‌هاي مولكولي مورد بررسي قرار گرفت. مدفوع از جهت حضور اواوسيست‌هاي كريپتوسپوريديوم توسط روش شناورسازي با آب شكر شيتر و به دنبال آن روش رنگ‌آميزي ذيل نلسون  مورد بررسي قرار گرفت. دي ان آ انگل استخراج و پروتكل multiplex nestedPCR براساس ژن 18srRNA جهت شناسايي سه گونه سازگار در گاو (يعني كريپتوسپوريديوم اندرسوني،  كريپتوسپوريديوم بوويس و كريپتوسپوريديوم رايانه) به علاوه گونه مشترك بين انسان و دام يعني كريپتوسپوريديوم پارووم انجام شد. نتايج: 110 نمونه مدفوع از دامداري­هاي موجود در استان البرز و 50 نمونه مدفوع نيز از دامداري­هاي شهر شاهرود جمع­آوري گرديد. از 160راس حيوان مورد آزمايش 90 راس ماده و 70 راس نر بودند. در مجموع در ميان 160 راس دام مورد آزمايش 85 مورد (53.12 درصد) مبتلا به اسهال بودند كه 55 مورد (34.37درصد) از اين تعداد حيوان تحت آزمايش با استفاده از رنگ‌آميزي ذيل‌ نلسون مثبت تشخيص داده شدند. از آنجايي‌كه تمام موارد مثبت مربوط به نمونه­هاي اسهالي و مرتبط با گوساله­هاي زير يك ماه بود، ارتباط معني­داري مابين وضعيت اسهال و حضور اين انگل مشاهده گرديد (0.05p lt;). از نظر توزيع فصلي تفاوتي در ميزان موارد اسهالي و موارد مثبت انگلي مشاهده نشد. حضور باند 305 جفت بازي در كليه نمونه­هاي مثبت ذيل نلسون مويد حضور گونه كريپتوسپوريديوم پارووم در تمامي نمونه­ها بود. نتيجه‌گيري نهايي: گوساله­هاي شيرخوار بيشتر با كريپتوسپوريديومپارووم آلوده مي­شوند كه تحقيق حاضر نيز مويد اين مطلب بود.