عنوان مقاله :
مطالعۀ ژنومي ناتوكيناز جداشده از باسيل‌هاي خاك و كلون‌كردن آن در باكتري اشريشيا كلي به‌منظور استفادۀ دارويي
عنوان به زبان ديگر :
The Genomic Study of Nattokinase Isolated from Soil Bacilli and its Cloning in Escherichia Coli for Medicinal Use
پديد آورندگان :
اصفيا، مينو دانشگاه آزاد اسلامي واحد تهران شرق - گروه زيست شناسي، تهران، ايران , اميني، كيومرث دانشگاه آزاد اسلامي واحد ساوه - دانشكده علوم پايه، ساوه، ايران , كاوسي، مهسا دانشگاه آزاد اسلامي واحد تهران شرق - گروه زيست شناسي، تهران، ايران
كليدواژه :
ناتوكيناز , باسيلوس , كلون‌كردن
چكيده فارسي :
مقدمه: ناتوكيناز، آنزيمي استخراج‌شده از غذايي ژاپني است كه در فرايند تخمير آن توليد مي‌شود؛ اين آنزيم آثار مثبت درخور توجهي در درمان بيماريهاي قلبي عروقي، درمان يا پيشگيري از بيماريهاي آميلوئيدي همچون آلزايمر و كاهش كلسترول خون دارد. مطالعۀ حاضر در نظر داشته تا به مطالعۀ ژنومي ناتوكيناز جداشده از باسيل‌هاي خاك مناطق اطراف تهران و كلون‌كردن آن در باكتري اشريشيا كلي به‌منظور استفادۀ دارويي بپردازد.
مواد و روشها: در مطالعۀ حاضر، 60 نمونه از عمق 5 تا 10 سانتي‌متري خاك مناطق مختلف اطراف شهر تهران نمونه‌برداري و باكتري‌هاي باسيلوس آنها به روش‌هاي مولكولي و بيوشيميايي جداسازي شدند. باكتري‌هاي داراي ژن ناتوكيناز به روش PCR مشخص شدند و ژن تكثير‌شده در باكتري اشريشيا كلي كلون و توالي‌يابي شد؛ سپس بيان ژن به روش Real time PCR بررسي شد و روابط فيلوژنتيكي آن مشخص شدند.
نتايج: درنتيجۀ غربال‌گري نمونه‌هاي خاك ارسالي به آزمايشگاه، درمجموع 12 كلني مشكوك به باسيل‌هاي گرم مثبت جداسازي شدند كه بر اساس ويژگي‌هاي ريخت‌شناختي، ميكروسكوپي و آزمون‌هاي بيوشيميايي تعيين هويت شدند و مشخص شد 11 گونه ژن هدف را دارند. كلون‌كردن و بيان ژن ناتوكيناز به‌طور موفقيت‌آميز انجام و همولوژي 99 تا 100 درصدي با ساير آنزيم‌ها مشاهده شد.
بحث و نتيجه گيري: در بررسي حاضر، ژن ناتوكيناز از باكتري باسيلوس سوبتيليس RH5 جداشده از خاك‌هاي مناطق اطراف تهران با موفقيت در وكتور بياني PTG19-T كلون شد و بيان موفقيت‌آميز ژن آن نشان داد با گسترش اين روش مي‌توان در راستاي توليد صنعتي اين آنزيم مهم گام برداشت.
چكيده لاتين :
Introduction: Nattokinase is an enzyme extracted from Japanese food produced in the fermentation process. This enzyme has significant positive effects in the treatment of cardiovascular diseases, the treatment or prevention of amyloid diseases such as Alzheimer disease and the reduction of blood cholesterol. This genomic study aimed to investigate the Nattokinase isolated from soil bacilli in areas around Tehran and its cloning in Escherichia coli bacteria for medicinal use.
Materials and methods: In this study, 60 samples were collected from 5-10 cm depth of soil of different areas around Tehran and their Bacillus bacteria were isolated by molecular and biochemical methods. By the PCR method, the bacteria with the Nattokinase gene were identified and the amplified gene was cloned into E. coli and sequenced. The gene expression was then evaluated by Real Time PCR and its phylogenetic relationships were determined.
Results: As a result of screening soil samples sent to the laboratory, a total of 12 suspected colonies were isolated from Gram-positive bacilli which were identified based on morphological, microscopic, and biochemical tests. Then, 11 species was determined as target genes. The cloning and expression of Nattokinase gene were successfully performed and the homology of 99-100% with other enzymes was observed.
Discussion and conclusion: In the present study, the Nattokinase gene from Bacillus subtilis RH5 isolated from soils around Tehran was successfully cloned into PTG19-T expression vector. The successful expression of its gene showed that it could be expanded by this method for industrial production.
عنوان نشريه :
زيست شناسي ميكروارگانيسم ها
