شناسايي سويه هوازي اجباري Aeribacillus pallidus Gh1 جدا شده از چشمه آب گرم قينرجه در استان اردبيل

Identification of a strictly aerobic Aeribacillus pallidus strain Gh1 from a hot water spring in Gheynarjeh, Ardebil Province

نمونه‌هاي آب از چشمه آب معدني گرم قينرجه استان اردبيل در اطراف كوه سبلان جمعآوري شد. پس از كشت، از ميان باكتريهاي رشد داده شده، باكتري Gh1 به دليل رشد سريع‌تر در محيط­هاي انتخابي و بازه دمايي مورد نظر، براي بررسيهاي بيشتر انتخاب شد. ويژگي­هاي باكتري با استفاده از كشت روي محيط‌هاي كشت اختصاصي در شرايط هوازي و بي­هوازي، آزمايش‌هاي بيوشيميايي، تعيين هويت برخي ليپيدها، تعيين توالي بازي 16S rDNA و ترسيم درخت فيلوژنتيك به دست آمد. باكتري Gh1، گرم مثبت، اسپوردار و غيرمتحرك بود. طول و عرض سويه 4-3 ×1 ميكرومتر بود و اسپورهاي آن مستطيل شكل و انتهايي بودند. دماي مطلوب رشد 60-58 درجه سانتي‌گراد و حداقل و حداكثر دماي رشد به ترتيب 30 و 72 درجه سانتي‌گراد بود. pH مطلوب رشد 0/8 بود و باكتري در pH بين 6 تا 10 رشد مي­كرد. غلظت 0/1-5/0 درصد NaCl سرعت رشد را بالا برد، اما غلظت 0/2 درصد NaCl رشد را مهار كرد. تنها منبع هيدروكربني با اثر مثبت روي رشد باكتري، نشاسته بود. علاوه بر فعاليت آميلازي، باكتري داراي فعاليتهاي ژلاتينازي، كاتالازي و اكسيدازي نيز بود. سويه Gh1 هوازي بود و روي محيط كشت بي­هوازي رشد نكرد. بررسي ليپيدهاي قطبي نشان داد سويه حامل فسفاتيديل اتانول آمين، ديفسفاتيديل گليسرول، فسفاتيديل گليسرل و چندين ليپيد و فسفوليپيد شناسايي نشده بود. ديآمينو پيمليك اسيد در ديواره باكتري موجود نبود. بررسي توالي 16S rDNA نشان داد اين توالي 72/99 درصد با باكتري Aeribacillus pallidus يكساني داشت. ويژگي­هاي مهم ديگر باكتري، مانند تحرك و تنفس بي­هوازي، با گزارش­هاي پيشين متفاوت بودند. نتايج به دست آمده همچنين نشان داد كه نمي­توان از وجود فسفاتيديل اتانول آمين به عنوان معياري براي تفكيك Aeribacillus از Geobacillus استفاده كرد. كليدواژه‌ها

Water samples were collected from Gheynarjeh hot water spring, around Sabalan Mountain in Ardebil province. One isolate (Gh1), isolated from the hot water spring was chosen for further studies. This selection was based on the isolates ability to grow faster and within the temperature limits chosen. Isolate characteristics were determined by culture on various selective aerobic and anaerobic media, biochemical assays, identification of typical lipids, 16S rDNA sequencing and drawing the phylogenetic tree. Isolate Gh1 was 1μm wide and 3-4μm in length and an endospore-forming non-motile Gram positive bacillus with rectangular terminal spores. The optimal growth temperature was 58-60°C, with Tmin and Tmax at 30°C and 72°C, respectively. The optimal pH for growth was 8.0 and it grew between pH 6 and 10. NaCl concentrations of 0.5–1.0% encouraged growth, but at 2% NaCl, growth was inhibited. The only carbohydrate source with a positive effect on bacterial growth was starch. The isolate exhibited amylolytic as well as gelatinolytic, catalase and oxidase activities. The isolate was aerobic and no growth was observed on anaerobic medium. Cell wall fatty acid analysis showed the presence of phosphatidyl ethanolamine, diphosphatidyl glycerol, phosphatidyl glycerol and several unidentified lipids and phospholipids. Diaminopimelic acid could not be detected in the peptidoglycan. The 16S rDNA sequence analysis exhibited 99.72% identity with Aeribacillus pallidus. Other important characteristics, such as movement and anaerobiosis were different from those previously reported isolates. In addition, the results showed that the presence/absence of phosphatidyl ethanolamine cannot be used as a variable for differentiating between Geobacillus and Aeribacillus.