مهندسي و توليد آنزيم نوتركيب ريبونوكلئاز پانكراس گاوي (RNase A) به عنوان يك پتانسيل دارويي

هدف: ايمنوتوكسين ها يكي از اميدبخش ترين روش ها در حوزه هاي درماني و به ويژه درمان سرطان مي باشند كه داراي ساختار منحصر به فرد توكسين آنتي‌بادي هستند و با گذر از غشاي سلولي و ورود به داخل سلول هدف باعث از بين رفتن سلول هدف مي شوند. هدف اين پژوهش مهندسي و طراحي آنزيم پانكراس گاوي (RNase A) در جهت فرار از مهاركننده ريبونوكلئازي (RI) به عنوان بخش توكسين در طراحي ايمنوتوكسين هاي مورد استفاده در حوزه هاي درماني مي باشد.مواد و روش: پس از بررسي هاي بيوانفورماتيك با استفاده از نرم افزار PyMol، مهندسي و تعويض آمينواسيد هدف در ژن وحشي كد كننده توالي RNase A (K91A) صورت پذيرفت. پروتئين هاي نوع وحشي و نوتركيب در باكتري E.coli سويه BL21(D3) بيان، refold و با استفاده از ژل SDS PAGE تاييد گرديدند. خالص سازي پروتئين هاي توليدي با استفاده از كروماتوگرافي تمايلي تثبيت شده با يون فلزي براي His tagانجام شد. نتايج: نتايج نشان داد غلظت پروتئين ها براي آنزيم RNase A وحشي و آنزيم نوتركيب به ترتيب 3 و 2/2 گرم بر ليتر بود. نتايج اندازه گيري فعاليت هيدرولازي آنزيم هاي توليدي در حضور غلظت هاي مختلفي از مهار‌كننده هاي ريبونوكلئازي نشان داد كه واريانت نوتركيب در مقايسه با آنزيم وحشي حساسيت كمتري نسبت به مهاركننده داشته و هم چنين اين واريانت افزايش فعاليت كاتاليكي را در حضور مهار كننده نسبت به آنزيم وحشي دارا مي باشد. نتايج حاصل از بررسي فعاليت آنزيمي آنزيم نوتركيب نسبت به آنزيم وحشي در حضور و عدم حضور ممانعت كننده ريبونوكلئازي نشان دادند كه اثر متقابل بين آنزيمRNase A و مهاركننده ريبونوكلئازي را مي توان با دست كاري آمينو اسيدهاي درگير در اين برهم كنش مختل نمود. نتيجه گيري: با توجه به نتايج پژوهش حاضر مي توان اين گونه استنباط نمود كه آنزيم RNase A داراي قابليت استفاده به عنوان يك داروي اميد بخش در مهندسي و توليد ايمنوتوكسين ها مي باشد.