بررسي ميزان بيان ژن‌ ID1 در سلول ‌هاي AGS ترنسفكت شده با وكتور نوتركيب pFLAG-CMV3-tagD

Evaluation of the Expression of ID1 Gene in AGS Cells Transfected with pFLAG-CMV3-tagD Recombinant Vector

مقدمه: پروتئين ID، باعث افزايش تكثير سلولي مي شود و از طرفي تمايز را مهار كرده كه ارتباط آن با روند تومور­زايي روده را مشخص مي­ كند. عفونت هليكوباكتر با بيان ژن ­هاي مختلف ID در ارتباط است و بنا بر اين هدف از اين تحقيق بررسي بيان ژن­ ID1 در سلول ­هاي AGS ترانسفكت شده با وكتور نوتركيب pFLAG-CMV-3-tagD است. مواد و روش­ ها: در پژوهــش حاضر سلول ­هاي AGS در محيط كشت RPMI-1640 حاوي درصد سرم جنين گاوي رشد داده­ شد. اين سلول­ ها با دو پلاسميد pFLAG-CMV-3-tagD يا pFLAG-CMV-3 ترانسفكت شدند و سلول ­هاي دريافت كننده پلاسميد با افزودن 600 ميلي­ گرم در ليتر G418، انتخاب گرديدند. سپس RNA كل سلول با استفاده از محلول RNX-Plus تخليص شد و سنتز cDNA با كمك كيت انجام شد. سطح بيان mRNA ژن ID1 به روش q-RT PCR و با كاربرد پرايمرهاي مناسب بررسي شد. در نهايت با استفاده از نرم افزار SPSSو آزمون ‌هاي آماري t-test Indepent بيان هر يك از ژن­ ها مورد بررسي قرار گرفت. يافته هاي پژوهش: با روش RT-PCR، بيان موفقيت آميز ژن tagD هليكوباكتر پيلوري در سلول ­هاي AGS تاييد شد. آناليز بيان ژن نشان داد كه بيان ژن­ ID1 به صورت معني ‌داري در سلول ­هاي AGS تيمار شده با tagD نسبت به سلـــول­ هاي كنترل، كاهـــش يافـــته است(P=0.0113). بحث و نتيجه گيري: تحقيق حاضر نشان داد كه بيان ژن­ ID1 در سلول ­هاي تحت تيمار با ژن tagD هليكوباكتر پيلوري، تغيير مي ­يابد و به نظر مي ­رسد، ژن tagD هليكوباكتر پيلوري در ايجاد اين تغيير بيان نقش داشته­ باشد.

Introduction: The ID protein enhances cell proliferation and inhibits differentiation, which determines its association with the process of intestinal tumorigenesis. Helicobacter infection is associated with the expression of different ID genes. This study aimed to investigate the expression of the ID1 gene in AGS cells transfected with the pFLAG-CMV-3-tagD recombinant vector. Materials & Methods: In the present study, AGS cells were cultured in the RPMI-1640 medium containing 10% bovine fetal serum. Subsequently, these cells were transfected with two pFLAG-CMV-3-tagD or pFLAGCMV- 3 plasmids. Moreover, the plasmid recipient cells were selected by adding 600 mg/LG418. Following that, wwhole-cell RNA was purified using RNX-Plus solution, and the cDNA was synthesized using a kit. The mRNA expression level of ID1 was assessed using q-RT PCR with appropriate primers. Eventually, the expression of each gene was evaluated in SPSS software through an independent t-test. Ethics code: IR. IAU.SHK.REC.1399.026 Findings: The results of RT-PCR confirmed the successful expression of the helicobacter pylori tagD gene in AGS cells. Moreover, the gene expression analysis showed that the ID1 gene expression was significantly decreased in tagD-treated AGS cells, compared to the control cells (P=0.0113). Discussions & Conclusions: The present study showed that the ID1 gene expression was altered in cells treated with the helicobacter pylori tagD gene. In addition, it seems that the helicobacter pylori tagD gene is involved in this expression change.