ايجاد سيستم شناسايي وجود كوفاكتور موليبدئوم در باكتري Escherichia coli

يكي از آنزيم هاي درگير در تطبيق پذيري با شرايط مختلف محيطي، آنزيم بيوتين سولفوكسايد ريداكتاز (BisC) است كه علاوه بر توانايي تبديل بيوتين سولفوكسايد به بيوتين در شرايط اكسيداتيو، ميتواند متيونين سولفوكسايد را نيز به متيونين تبديل كند. اسيد آمينه متيونين چه بصورت آزاد و چه در زنجيره پروتئيني اهميت بسياري در فرايند سنتز پروتئين و فعاليت آن داراست. آنزيم بيوتين سولفوكسايد ريداكتاز (BisC) براي فعال بودن وابسته به كوفاكتور باكتريايي MGDـBis مي باشد. در اين مطالعه به منظور تاييد فعال بودن كوفاكتور باكتريايي MGDـBis روشي غيرمستقيم طراحي شد كه در اين روش از آنزيم باكتريايي بيوتين سولفوكسايد (BisC) به عنوان ژن گزارشگر استفاده شد. در اين راستا سازه ژني BisCـpJet ساخته شد و شوك حرارتي به باكتري E.coli استرين Mach1 منتقل شد. كلون هاي تشكيل شده در محيط LB جامد با آنتي بيوتيك آمپيسيلين 200 micro;g/ml انتخاب شدند و سپس واكنش PCR روي آنها صورت گرفت. پس از تاييد نتايج توالي يابي كلون هاي مثبت، قطعه مورد نظر جدا و به ناقل بياني pETDuet انتقال داده شد. كلون lrm;هاي حاوي ژن به باكتري ميزبان Rossetta منتقل شدند. فرابيان آنزيم BisC بر روي ژل PAGEـSDS مورد بررسي قرار گرفت و نيز فعاليت اين آنزيم بصورت باند بي lrm;رنگ بر اثر اكسيد شدن متيل وايولوژن روي ژل Native مشاهده شد كه نشان دهنده حضور فعال كوفاكتور MGDـBis بود.