طراحي و بيان كايمري پپتيد لاكتوفرامپين - لاكتوفريسين گاوي با هدف توليد نوتركيب اين پروتئين در گياه توتون

لاكتوفرين كه شامل پپتيدهاي لاكتوفرامپين و لاكتوفريسين مي‌باشد يكي از گليكوپروتئين‌هاي شير با خواص ضد ميكروبي است. لاكتوفرين به عنوان جزء ذاتي سيستم ايمني مطرح بوده و اولين سد دفاعي در برابر حملات ميكروبي را نشان مي‌دهد. هدف از اين پژوهش سنتز كايمري اين دو زير واحد پپتيدي و ارزيابي تاثير پپتيد نوتركيب توليد شده روي پاتوژن‌هاي شاخص مواد غذايي بود. توالي كايمري لاكتوفرامپين لاكتوفريسين پس از بهينه شدن بر اساس كدون ترجيحي بيان شونده در گياه توتون، به صورت مصنوعي درون وكتور pGHسنتز شد و سپس به وكتور بياني pBI121 منتقل گرديد. پلاسميد بياني نوتركيب از طريق فرآيند ذوب و انجماد به باكتري آگروباكتريوم ريزوژنز منتقل شد. در نهايت با كمك روش ديسك برگ به گياه توتون منتقل گرديد. استخراج پروتئين نوتركيب از گياه توتون با استفاده از روش TrisHCl انجام و فرآيند تخليص با استفاده از كروماتوگرافي ستون‌هاي نيكل آگارز انجام شد. آزمايش MIC در ميكروپليت 96 خانه استريل و با روش رقيق سازي انجام شد .در نهايت نتايج نشان داد كه مقدار پروتئين نوتركيب 1.52 ميليگرم در ميلي‌ليتر مي‌باشد و كيفيت مطلوبي نيز دارد. همچنين نتايج نشان داد كه تركيب كايمري اثر بازدارندگي خوبي روي ميكروارگانيسم‌هاي بيماري‌زا دارد.