دستكاري ژنتيكي سلولهاي بنيادي مزانشيمي انساني مشتق از چربي با miR-34a

سابقه و هدف: ژن تراپي ايمن و موثر به عنوان يكي از اهداف درماني در بسياري از بيماري ها در نظر گرفته مي شود. با توجه به نقش مهم سلول هاي بنيادي در سل تراپي، اين مطالعه با هدف توليد سلول هاي بنيادي مزانشيمي مشتق از چربي انسان (hASC) با افزايش بيان miR34a انجام شد. روش بررسي: توالي پيش ساز hsamir34a در وكتورPCDH لنتي ويروس كلون شد. وكتور نوتركيب و دو وكتور كمكي يعني psPAX و pMD2 با روش كلسيم فسفات به داخل HEK293T منتقل شدند. سوپ ويروسي جمع آوري و با اولترا سانتريفيوژ تغليظ شد. سلول هايHEK293T ترانسديوس شده در روز چهارم با فلوسايتومتري ارزيابي شدند. پس از تعيين غلظت ويروسي، سلول هاي hASC با ويروس هاي تغليظ شده ترانسديوس شدند. استخراج RNA و سنتز cDNA به منظور ارزيابي ميزان بيان miR34a با Real Time PCR انجام شد. يافته ها: توالي پيش ساز hsamir34a كلون شده در وكتور PCDH با colonyPCR و DNA sequencing تائيد شد. ترانسداكشن سلول هاي HEK293T و hASC در زير ميكروسكوپ معكوس فلورسنت دار و فلوسايتومتري مورد تائيد قرار گرفتند. ارزيابي ميزان بيان miR34a در سلول هاي آلوده به ويروس نوتركيب نشان داد كه نسبت بيان miR34a در گروه تست به طور معني داري بيشتر از گروه كنترل بود (0.001=P). نتيجه گيري: اين مطالعه نشان دادكه از سيستم هاي لنتي ويروس ها مي توان براي وارد كردن ژن هاي خارجي نظير miR34a به سلول ها استفاده كرد. همچنين اين مطالعه نشان داد كه سلول هاي بنيادي دستكاري شده ژنتيكي به عنوان delivery system براي انتقال miR34a و يا هر ژن ديگري مي توانند استفاده شوند.