طراحي كيت دات الايزا در جهت تشخيص آنتروتوكسين هاي (SEA) باكتري استافيلوكوكوس اورئوس و مقايسه آن با روش ساندويچ الايزا، تعيين صحت تشخيص آن در نمونه نان‌هاي خامه‌ايي

Designing Dot ELISA kit for detection of Staphylococcus aureus SEA enterotoxin and Sandwich ELISA compare, its validation in pastry cream bread

در اين مطالعه تشخيص و شناسايي آنتروتوكسين استافيلوكوكوس اورئوس به كمك طراحي كيت حساس Dot ELISA انجام شده است. در اين مطالعه از كاغذهاي نيتروسلولزي با منافذ 0/22 ميكرون به‌عنوان بستر استفاده شده است، بر روي بستر ياد شده آنتي‌بادي اختصاصي آنتروتوكسين استافيلوكوكوس اورئوس با رقت 1/500 كوت گرديده و سپس توكسين اختصاصي به آنتي‌بادي‌هاي چسبيده شده مجاورت داده شده است؛ در ادامه آنتي‌بادي نشان‌دار شده با آنزيم HRP با رقت 1/2000 اضافه گرديده، باگذشت زمان و شستشوي مجدد، سوبسترا اضافه شد؛ در اين آزمايش نمونه‌ها به‌صورت دستي آلوده شده و سپس با روش ساندويچ الايزا به‌ عنوان استاندارد طلايي مورد مقايسه قرار گرفت، اين كيت قادر به تشخيص 50 نانوگرم بر ميلي‌ليتر به بالا توكسين A بوده و چنانچه ميزان توكسين كمتر از اين مقدار باشد آن را به‌صورت منفي گزارش كرده، در اين آزمايش از 40 نمونه جمع‌آوري‌شده، 4 نمونه مثبت گزارش‌شده، نشان مي‌دهد كه حدود 10 % نمونه‌هاي جمع‌آوري‌شده آلوده بوده است؛ امروزه با استفاده از كيت الايزا دات به‌عنوان روش سريع با حساسيت و ويژگي نسبي، مي‌توان تكرارپذيري جهت تشخيص آنتروتوكسين A استافيلوكوكوس در نان‌هاي خامه‌ايي را بهبود بخشيد.

In this study, detection and recognition of Staphylococcus aureus enterotoxin was performed by designing a Dot ELISA sensitive kit. In the present study, nitrocellulose membrane (NCM) with 0.22 micron pores was applied as the bed, and 1:500 diluted specific antibody of Staphylococcus aureus enterotoxin was coated on the NCM. Next, The HRP-tagged antibody was added with dilution of 1/2000, and the substrate was added gradually and rewashed. In this experiment, the samples were manually contaminated and then compared with the ELISA sandwich method as a gold standard. The kit is capable of detecting 50 ng/ml and higher of toxin A, and if the amount of toxin is less, it will report it negatively. In this test, of which 40 samples were collected and 4 positive cases were reported, it was revealed that about 10% of the collected samples were contaminated. Nowadays, using the Dot ELISA kit as a quick method with relative sensitivity and properties, it is possible to improve the repeatability of detecting Staphylococcus enterotoxin A in creamy candies.