جداسازي ويروس بيماري نيوكاسل از طيور صنعتي و ارزيابي توانايي ويروس در القاء بيان ژن‌هاي مرتبط آپوپتوز در سلول‌هاي توموري 7MCF

Isolation of Newcastle disease virus from industrial poultry and assessing its ability to induce expression of apoptosis-related genes in MCF-7 tumor cells

ويروس بيماري نيوكاسل از جمله ويروس هاي انكوليتيك است كه در مطالعات مختلف تاثير برخي سويه هاي اين ويروس در درمان تومورهاي انسان بررسي شده است. با وجود اين، مكانيسم دقيق مرگ سلول توموري توسط ويروس بيماري نيوكاسل مشخص نيست. اين ويروس در گونه هاي مختلف پرندگان بيماريزا است و بيماري با واگيري زياد ايجاد مي كند. هدف مطالعه حاضر جداسازي ويروس بيماري نيوكاسل از طيور صنعتي و بررسي تاثير آن بر القاء بيان ژن هاي مرتبط با مسير داخلي و مسير خارجي آپوپتوز در سلول هاي توموري پستان انسان بود. ويروس بيماري نيوكاسل از طيور صنعتي با كشت در تخم مرغ جنين دار جداسازي شد و باآازمون هاي هماگلوتيناسيون و RT-PCR تاييد شد. در شرايط برون تني سلول هاي 7-MCF توسط ويروس جداسازي شده آلوده شدند. پس از استخراج RNA از سلول هاي توموري و ساختن cDNA، سطح بيان ژن هاي BAX، BAK و كاسپازهاي 3، 8 و 9 با تكنيك Real-time RT-PCR در سلول هاي توموري آلوده به ويروس ارزيابي شد. آناليز داده هاي PCR نشان داد بيان ژن هاي BAX و كاسپاز 9 در سلول هاي توموري آلوده به ويروس بيماري نيوكاسل به طور معني-داري بيشتر از بيان آنها در سلول هاي توموري كنترل است. بيان ژن هاي BAK، كاسپاز 3 و كاسپاز 8 تغيير معني داري در سلول هاي توموري آلوده به ويروس در مقايسه با سلول هاي توموري كنترل نداشت. اين يافته ها نشان مي دهند ويروس بيماري نيوكاسل جداسازي شده از طيور صنعتي مي تواند شروع مسير داخلي آپوپتوز را در سلول هاي توموري 7-MCF القاء كند.

Newcastle disease virus has been investigated in several studies as an oncolytic virus to treat human tumors. However, precise mechanism of tumor cell killing by this virus is unknown. The aim of this study was isolation of Newcastle disease virus from industrial poultry and examination of its ability to induce expression of the extrinsic and the intrinsic pathways of apoptosis-related genes in human breast carcinoma cells. Newcastle disease virus was isolated from industrial poultry by culture in embryonated chicken eggs and then identified by haemagglutination test and RT-PCR technique. MCF-7 breast carcinoma cells were infected with the isolated virus in vitro. After RNA extraction and cDNA synthesis, gene expression levels of BAX, BAK, caspases-3, -8, and -9 were assessed in the virus-infected tumor cells using real-time RT-PCR technique. PCR data analysis showed that gene expression levels of BAX and caspase-9 were significantly higher in virus-infected tumor cells than that in control tumor cells. Gene expression levels of BAK and caspases-3 and -8 were not significantly altered in virus-infected tumor cells in comparison with control tumor cells. These results suggest that Newcastle disease virus isolated from industrial poultry can trigger the intrinsic pathway of apoptosis in MCF-7 tumor cells.