تأثير سطوح مختلف پروتئين و جايگزيني DL متيونين با L متيونين بر بيان ژن‌هاي ميوژنيك در بلدرچين ژاپني

The effect of substitution to DL-methionine with L-methionine and dietary protein levels on Expression Myogenic Genes in Japanese quail

اين تحقيق به منظور بررسي اثر سطوح مختلف پروتئين (20 و 24 درصد) و جايگزيني DL متيونين با L متيونين، بر بيان ژن‌هاي ميوژنيك (آتروژين-1 و MYF-5) با اسفاده از تكنيك RT-qPCR در بلدرچين ژاپني انجام شد. اين آزمايش به صورت فاكتوريل 2×2 در قالب طرح كاملا تصادفي با چهار تيمار و چهار تكرار و 15 قطعه بلدرچين در هر تكرار به اجرا در آمد. تيمار اول شامل DL متيونين و پروتئين 20 درصد بوده كه گروه كنترل ما بود. تيمار دوم شامل L متيونين و پروتئين 24 درصد، همچنين تيمار سوم شامل L متيونين و پروتئين 20 درصد بوده و تيمار چهارم شامل DL متيونين و پروتئين 24 درصد بودند. پس از 35 روز تغذيه و نگهداري بلدرچين­ها، به دنبال 8 ساعت گرسنگي، از هر تكرار 2 بلدرچين كشتار و قطعه‌اي از بافت ماهيچه سينه­ي آن­ها به همراه ازت مايع به آزمايشگاه منتقل و در دماي 80– سانتي­گراد ذخيره شدند. پس از استخراج RNA كل، كيفيت آن اندازه­گيري گرديد و براي توليد و سنتز cDNA مورد استفاده قرار گرفت. در نهايت بيان ژن‌هاي آتروژين-1 و MYF-5 با استفاده از تكنيك Real-time qPCR ارزيابي شد. در اين روش ژن بتااكتين به عنوان ژن خانه­دار (منبع) جهت نرمال نمودن داده‌ها استفاده شد. نتايج اين آزمايش نشان داد كه با كاهش سطح پروتئين از 24 درصد به 20 درصد بيان ژن آتروژين-1 افزايش و بيان ژن MYF-5 كاهش پيدا كرده است. به علاوه، جايگزيني DL متيونين با L متيونين تأثيري بر بيان ژن­هاي آتروژين-1 و MYF-5 ندارد. نتايج بيان­كننده­ي اين موضوع بود كه مي‌توان DL متيونين جيره را با L متيونين در جيره­ي بلدرچين ژاپني جايگزين كرد و سطح پروتئين 24 درصد در جيره از 20 درصد مناسب­تر است. كليدواژه‌ها

This research was conducted to investigate the effect of different levels of protein (20 and 24%) and the replacement of methionine DL with L methionine on the expression of myogenic genes (atrogin-1 and MYF-5) using the RT-qPCR technique in Japanese quail. This experiment was done in the form of a 2×2 factorial with 4 treatments and 4 repetitions and 15 quail in each replicate. The first treatment included DL-methionine and 20% protein (control group). The second treatment consisted of L methionine and 24% proteins, and the third treatment included L methionine and protein 20% and the fourth treatment included DL-methionine and protein 24%. After 35 days of feeding and keeping the quails, with 8 hours interval of hunger, 2 quails were slaughtered in each replicate, and a piece of their chest has been removed immediately and was transferred to the laboratory with Liquid nitrogen, and froze in -80°c. After extraction of the whole RNA, its quality was measured and was used to generate and synthesis the cDNA. Eventually, the expression of myogenic genes was measured by the real-time PCR method. In this method, 𝜷-actin gene, as the source gene, was used to normalize the data. The results showed that by decreasing the protein level from 24% to 20%, atrogin-1 gene expression increased and the MYF-5 gene expression decreased. Also, the replacement of methionine DL with L-methionine did not have a significant effect on the expression of myogenic genes. The results indicated that DL-methionine could be replaced with L methionine, and a 24% protein level is more suitable than 20% in the Japanese quail diet.