عنوان مقاله :
بيان سازه دكامر لومازين سنتاز با منشأ بروسلايي در سيستم بياني پروكاريوتي
عنوان به زبان ديگر :
Expression of a decameric lumazine synthase from Brucella spp. in prokaryotic expression system
پديد آورندگان :
مجيدي، بهجت دانشگاه پيام نور، تهران، ايران - گروه زيست شناسي , فتحي نجفي، محسن سازمان تحقيقات، آموزش و ترويج كشاورزي - مؤسسه تحقيقات واكسن و سرم‌سازي رازي، مشهد , سعيديان، شهريار دانشگاه پيام نور، تهران، ايران - گروه زيست شناسي
كليدواژه :
بروسلا , بيان , خالص‌سازي , لومازين سنتاز , نوتركيب
چكيده فارسي :
لومازين سنتاز بروسلايي، آنزيم دخيل در بيوسنتز ريبوفلاوين، مركب از 10 زيرواحد مشابه مي‌باشد كه به صورت كپسيدي تجمع مي يابند. با توجه به كاربردهاي وسيع لومازين سنتازها در زمينه‌هاي بيولوژي، توليد لومازين سنتاز در مقياس بالا و خالص‌سازي كارآمد آن ضروري مي‌نمايد. در مطالعه حاضر، ساختار اوليه لومازين سنتاز بروسلا ملي‌تنسيس از پايگاه داده NCBI دريافت گرديد. توالي لومازين سنتاز ابتدا با استفاده از واكنش‌هاي زنجيره‌اي پليمراز تكثير گرديد و سپس كلون و بيان گرديد. بيان سازه با استفاده از پلازميد بياني pET28a و در باكتري BL21 DE3 انجام گرديد. براي حذف بقاياي ديواره باكتري و خالص‌سازي پروتئين، از روش‌هاي رسوب‌دهي با آمونيوم سولفات و تكنيك‌هاي كروماتوگرافي تعويض يوني استفاده گرديد. از آزمون‌هاي اليزا و وسترن بلات جهت تأييد بيان و مانيتورينگ مراحل استفاده گرديد. خالص‌سازي لومازين سنتاز با استفاده از روش كروماتوگرافي با استفاده از سفادكس دي اتيل آمينو اتيل DEAE منجر به حصول باند يگانه در الكتروفورز با ژل پلي اكريلاميد (SDS-PAGE) گرديد. نتايج اين بررسي نشان داد كه روش‌هاي بهينه‌سازي بيان و خالص‌سازي مورد استفاده در اين تحقيق، مي‌تواند در توليد لومازين سنتاز نوتركيب بروسلايي خالص و در مقياس بالا به‌عنوان يك محصول نوتركيب ارزشمند در تحقيقات واكسن استفاده گردد.
چكيده لاتين :
Brucella sp. Lumazine synthase, the enzyme involved in riboflavin biosynthesis composed of 10
identical subunits. According to extended
applications of LS, it is necessary to set up a high
yield expression and purification method for this
enzyme.in current study, Lumazine synthase primary
structure was achieved from NCBI database and it
was expressed by pET28a in BL21 E. coli. The
optimum concentrations of IPTG and Kanamycin
was evaluated and applied for high yield expression
of rBLS. For LPS removal and purification of
protein, ammonium precipitation and ion exchange
chromatography were performed and no background
in ELISA (against Brucella) was observed. ELISA
and Western Blotting techniques were applied for
expression and purification confirming. For
monitoring of purification, SDS-PAGE was applied.
Purification of protein with DEAE sephadex
(Diethylaminoethyl) resulted in a single band purified
rBLS. The approach applied in this study can be
used in generation a relatively pure rBLS as a valuable recombinant product in vaccine industries.
عنوان نشريه :
زيست شناسي جانوري تجربي
