طراحي DNA واكسن حاوي ژن هاي كدكننده sicl آنتي ژن هاي باكتري اشرشياكلي انتروتوكسيژنيك (ETEC) و اشريشياكلي انتروهموراژيك (EHEC)

Design of vaccine DNA containing genes encoding sicl Escherichia coli antigens Enterotoxigenic (ETEC) and Escherichia coli enterohemorrhagic (EHEC)

مقدمه اشريشياكلي انتروتوكسيژنيك عامل اسهال هاي باكتريايي كه منجر به مرگ و مير سالانه صدها هزار كودك مي شود. اشيرشيا كلي O157:H7 ، شايعترين سوش اشريشياكلي انتروهموراژيك است. توليد يك واكسن تركيبي موثر براي اشريشياكلي انتروهموراژيك و اشريشياكلي انتروتوكسيژنيك بسيار حايز اهميت است. مواد و روش ها در اين مطالعه تكثير و همسانه سازي ژن sicl ، بعنوان يك DNA واكسن صورت گرفت. ترادف ژنهاي كد كننده آنتي ژن از بانك ژني ارزيابي و اپي توپهاي آنها به منظور طراحي پرايمر براي ژن كايمري سنتتيك (تهيه شده از گروه اماني) بررسي شد و تكثير آن از طريق PCR صورت گرفت ،زير همسانه سازي ژن كايمريك چند قسمتي در وكتور بياني يوكاريوتيك به منظور ساخت DNA واكسن انجام شد و در آخر پروتيين با روش كروماتوگرافي نيكل تخليص و با وسترن بلات ارزيابي شد. نتايج نتايج ايمونوبلات بيان پروتيين كايمريك SICL به شكل ذرات نامحلول 12 ساعت پس از القا نمايانگر وجود يك باند 76 كيلو دالتوني است. تخليص پروتيين نوتركيب با استفاده از ترادف هيستيديني داخل ژن وتاييد پروتيين تخليص شده با آنتي بادي اختصاصي پروتيين نوتركيب ، صحت بيان پروتيين را نشان داد . بحث و نتيجه گيري مطالعات بيان و تخليص پروتيين و ارزيابي آن با وسترن بلات ، نشان دهنده بيان پروتيين در ميزبان است.

Introduction Enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) and Enterohemorrhagic Escherichia coli O157:H7 , the most common strains, are causes diarrhea that can kill hundreds of thousands of children annually. The development of an effective combination vaccine for enterohemorrhagic Escherichia coli and Enterotoxigenic Escherichia coli is very important. Materials and Methods In this study, the sicl gene was amplified and Subcloned as a DNA vaccine. The sequence of antigen encoding genes was evaluated from the genebank and their epitopes were evaluated to design of primer for the synthetic chimeric gene and was amplified by PCR. Subcloning of a multipartal chimeric gene in eukaryotic expression vector was performed to make a DNA vaccine and finally the protein was purified by nickel chromatography and evaluated by Western blotting. Results The immunoblotting results of the expression of SICL chimeric protein indicated the presence of a 76 kDa band in the form of insoluble particles after 12 hours induction. Purification of the recombinant protein using His tag sequencee and confirmation of the purified protein with the recombinant protein specific antibody demonstrated the accuracy of the protein expression. Discussion & Conclusion Protein expression, purification and verify by western blotting showed that this recombinant chimeric protein (SICL) can be expressed in eukaryotic host.