بررسي جهش هاي پيش از درمان منجر به مقاومت در برابر داروهاي مهاركننده مستقيم ويروس هپاتيت سي در بيماران مبتلا به هپاتيت سي مزمن

Detection of Pre-treatment mutations leading to resistance to direct hepatitis C virus blocking drugs in patients with chronic hepatitis C

زمينه و هدف ويروس هپاتيت سي تنها ميزبان آن انسان مي باشد. در كشور ما ژنوتيپ هاي 1a، 3a و 1b شايع ترين ژنوتيپ ها هستند. هدف از اين پژوهش تعيين فراواني بروز جهشهاي مقاوم به دارو در نواحي NS5A و NS5B كه هدف دارو هاي جديد ضد ويروس هپاتيت C هستند در بيماران مبتلا به هپاتيت سي مزمن با ژنوتيپ 1b بود كه با اين داروها تحت درمان قرار داشتند. روش كار در اين پژوهش تعداد 29 بيمارشركت داوطلبانه داشتند كه مبتلا به هپاتيت سي مزمن با ژنوتايپ 1b بودند و سابقه درمان ناموفق با ريباورين و انترفرون داشتند ولي از نظر درمان با داروهاي مستقيم الاثر مورد بررسي در اين طرح "بكر يا native" محسوب مي شدند. ژنوم ويروس از نمونه سرم بيماران با استفاده از كيت استخراج RNAي ويروسي شركت Roche استخراج شد. RT-PCR و nested PCR با استفاده از كيت تاكارا و پرايمرهاي اختصاصي خارجي و داخلي نواحي هدف بطور جداگانه انجام گرديد. سپس محصولات تعيين توالي شد و نتايج توسط نرم افزار Bio Edit ورژن (7.9.5.3) بررسي شد. سپس با استفاده از نرم افزار CLUSTAL W در نرم افزار MEGA ورژن (6) هم ترازي توالي ها (Multiple Sequencing) صورت پذيرفت. يافته ها تجزيه و تحليل توالي هاي هدف به منظورشناسايي جهش هاي مقاوم به داروهاي مورد بررسي، بروز اين جهش ها را در برابر دو داروي داكلاتاسوير و لديپاسوير در 5 بيمار (17/24 %) نشان داد. هرچند به دليل عدم وقوع جهش هاي مقاوم به داروي سوفوسبووير در ناحيه NS5B، تمام بيماران به درمان ضد ويروسي پاسخ دادند و اين پاسخ در پيگيري هاي بعدي نيز پايدار بود. نتيجه گيري استفاده از داروي سوفوسبووير در درمان بيماران مبتلا به هپاتيت سي مزمن با ژنوتايپ 1b كه سخت ترين ژنوتايپ اين ويروس از نظر پاسخ به درمان هاي ضد ويروسي است با نتايج بسيار اميدواركننده اي همراه بود و عليرغم شناسايي جهش هاي مقاوم به داروهاي داكلاتاسوير و لديپاسوير، استفاده از سوفوسبووير به درمان قطعي بيماران انجاميد. هرچند بدليل ماهيت جهش پذيري ويروس پايش روند بروز جهش هاي احتمالي كه ممكن است منجر به مقاومت در برابر سوفوبووير شود تا حذف ويروس از كشور بسيار ضروري است.

Human is the only host of hepatitis C virus. This virus has a positive single stranded RNA and lipoprotein envelop that has 7 confirmed genotypes. According to studies, genotypes 1a, 3a and 1b are the most common genotypes in Iran. No effective vaccine against HCV infection has been developed instead, advances in antiviral treatment using drugs that directly affect specific viral genomic regions to inhibit virus replication have promising results, particularly in the treatment of genotype 1 of HCV virus as a hard to treat genotype. These drugs have been used in our country for few years to treat patients with chronic hepatitis C infection so, according to the mutation prone characteristic of HCV genome which could be resulted in drug resistance monitoring of their effectiveness for early detection of resistant mutations has the great importance.The aim of this study was to determine the frequency of drug resistant mutations in NS5A and NS5B regions as targets of new hepatitis C antiviral drugs in patients with chronic HCV-1b infection who were under treatment with these drugs. Methods In this study, there were 29 volunteers with chronic HCV-1b infection who had failed to be treated with ribavirin and interferon but were considered “naïve” to direct acting anti-viral drugs. Viral genome was extracted from blood samples using Roche Viral RNA Extraction Kit. RT-PCR and nested PCR was performed by using specific external and internal primers separately by using the TaKaRa kit. The PCR products were sequenced and the results were verified by Bio Edit software version (7.9.5.3). Multiple alignment was performed by using CLUSTAL W software in MEGA version (6). Results Resistance mutations against anti HCV drugs in this study were identified in 5 (17.24%) patients out of 29 patients against daclatasvir and ledipasvir drugs. However, all patients responded to anti-HCV therapy due to the absence of resistant mutations in NS5b region that is the viral genomic target region of sofosbovir, and this response was sustained at follow-up. Conclusion Use of Sofosbuvir in treatment of patients with chronic HCV-1b infection which is the most difficult to treat HCV genotypes, was very promising. Despite identification of resistant mutations against Daclatasvir and Ledipasvir the use of Sofosbuvir resulted in complete treatment of patients. However, due to the mutable nature of the virus, monitoring of occurrence of possible resistant mutations against Sofosbuvir is necessary to achieve HCV elimination in our country.