بررسي مولكولي و تعيين آلودگي ليشمانيازيس احشايي در سگ هاي بدون علامت در مشكين شهر استان اردبيل ، شمال غرب ايران

Molecular analysis and infection Determination of visceral leishmaniasis in asymptomatic dogs in Meshkin-Shahr Ardabil province, northwestern Iran

انگل ليشمانيا اينفانتوم عامل اصلي ايجاد كننده ليشمانيازيس احشايي (Visceral leishmaniasis) است كه طيف گسترده اي از انسان و سگها را در ايران تهديد مي كند. هدف ما بررسي گونه هاي انگل ليشمانيا در مناطق آندميك براي تشخيص ليشمانيازيس احشايي با استفاده از ژن ITS-rDNA ، توالي يابي و تجزيه و تحليل فيلوژني بود. در اين مطالعه، نمونه برداري بوسيله لوله هاي خلاءدار حاوي EDTA از خون سگ هاي بدون علامت (31 قلاده) با استفاده از روش غير تهاجمي در اردبيل ، شمال غربي ايران در مرداد ماه 1398 انجام شد. DNA نمونه هاي جمع آوري شده استخراج شده، PCR و توالي يابي با هدف قرار دادن ژن ITS-rDNA انجام شد. براي نشان دادن وضعيت طبقه بندي گونه هاي ليشمانيا ، توالي ها به روش Maximum likelihood مورد تجزيه و تحليل فيلوژني قرار گرفت. از مجموع 31 نمونه سگ بدون علامت بدست آمده، 11 سگ به طور قطع آلوده به L. infantum تشخيص داده شدند. بيشترين تعداد آلودگي در گروه سني زير 5 سال بود كه نشان داد اين گروه نسبت به VL در اين منطقه حساس تر هستند و آلودگي عمدتا در جنس مذكر مشاهده گرديد. يافته هاي موجود نشان مي دهد كه نمونه برداري غير تهاجمي و روش هاي مولكولي در تشخيص ليشمانيازيس احشايي قابل اطمينان و مناسب هستند. ميزان شيوع VL در سگ هاي بدون علامت (35.5%) نشان دهنده يك هشدار براي بررسي و نظارت بر افراد / مخازن حساس در منطقه است.

Leishmania infantum parasite is the main causative agent of visceral leishmaniasis (VL) which threatens a wide range of humans and dogs in Iran. Our objective was to investigate Leishmania parasite species in Ardebil Province a well-known VL foci targeting ITS-rDNA gene, sequencing and phylogenetic analysis. Vacuum EDTA tubes were used for blood collection of asymptomatic dogs using non-invasive methods in Ardabil, northwestern Iran in August 2019. Phenol-chloroform DNA extraction, ITS-rDNA gene PCR and sequencing were performed. Leishmania species was accurately identified based on sequences and Maximum likelihood phylogenic analyzes. 11 of 31 asymptomatic dogs were definitively infected with L. infantum. Under 5 years old age group had the highest infection rate, which showed that this group is more sensitive to VL in this area and also the infection was mainly observed in male sheepdogs. These findings show that non-invasive sampling and molecular methods are reliable and convenient in the diagnosis of visceral leishmaniasis. Regarding the 35.5% infection ratio in the area control and monitoring measures of human individuals and canine reservoirs should be taken to consideration.