بررسي ضايعات كانديدايي ناخن و تعيين هويت گونه هاي جدا شده با روش هاي قارچ شناسي و مولكولي

The investigation of Candidial onychomycosis and determination of Candida species Isolated from patients by using conventional and molecular methods

هدف: اونيكومايكوزيس شايع ترين بيماري ناخن محسوب مي شود كه مخمرها از عوامل مهم بروز آن مي باشند. هدف مطالعه حاضر بررسي ضايعات كانديديايي ناخن و تعيين هويت گونه هاي جدا شده PCR-RFLP مي باشد. روش شناسي: در اين مطالعه مقطعي از 280 بيمار دچار ديستروفي ناخن مراجعه كننده به آزمايشگاه تخصصي قارچ شناسي در تهران نمونه تهيه شد. آزمايش مستقيم و كشت در محيط هاي سابورودكستروز آگار، كروم آگار كانديدا، كورن ميل آگار و تست لوله زايا بر روي مخمرهاي جدا شده از ضايعات ناخن انجام گرفت و در نهايت براي تشخيص نهايي گونه هاي كانديدايي كه تعيين هويت نشده، روش مولكولي PCR-RFLP با استفاده از آنزيم Msp1 انجام شد. يافته ها از 280 بيمار، 87 نفر انيكومايكوزيس كانديدايي داشتند كه 54 مورد كانديدا آلبيكنس و پس از آن به ترتيب كانديدا پاراپسيلوزيس 16 مورد، كانديدا تروپيكاليس7 مورد، كانديدا گلابراتا 6 مورد و كانديدا كروزيي 3 مورد و يك مورد كانديدا گيلرموندي بود. به منظور تعيين هويت گونه هاي مجهول و همچنين تاييد نتايج حاصل از روش هاي تشخيصي، تست ژنوتيپي بر روي 20 نمونه انجام گرديد و نتايج حاصل از كشت و آزمايش مستقيم و همچنين تعيين هويت گونه هاي مجهول را تاييد كرد. نتيجه گيري به دليل زمان بر بودن مراحل تشخيصي معمول در آزمايشگاه ها از جمله كشت ، استفاده از روش هاي ژنوتيپي سريع و مطمين مانند PCR-RFLP كه شناسايي را در حد گونه انجام مي دهد، بسيار كار آمد خواهد بود و روش هاي نوين مولكولي مي تواند در تشخيص و شناسايي گونه ها بسيار كمك كننده باشد.

Onychomycosis consider as the most common nail diseases and yeasts are the important causative agents in onychomycosis. The aim of current study is the investigation of candidial onychomycosis and investigation of isolated species using direct examination.culturing and PCR-RFLP techniques. Methods: In this cross- sectional study nail sampling has been examined in 280 patients with dystrophic nail problem who were the applicant of Medical mycology laboratory in Tehran. Direct examination test, Culturing on SDA, candida Chrome agar, Corn meal agar and germ tube test were used for identification of isolated yeasts from onychomycosis and finally PCR-RFLP techniques using MSP1 enzyme were performed for definitive diagnosis of Candida species which had not been identified by conventional methods. Results: Out of 280 patients with onychomycosis 54 cases (candida albicanse), 16 cases (candida parapsilosis), 7 cases (candida tropicalis), 6 cases (candida glabrata), 3 cases (candida krusei) and 1 case (candida guilliermondii) have been identified respectively. In order to identification of unknown species and also confirmation of the results of conventional methods PCR-RFLP genotyping methods have been performed on 20 samples. The results obtained from Culturing and direct examination and the identification of unknown species have been confirmed using PCR-RFLP methods. Conclusion: As conventional diagnostic laboratory methods such as culturing, are time-consuming, it is better to use fast and safe genotyping techniques (PCR-RFLP) due to the possibility of better identification in species level. Therefore using modern molecular methods for diagnosis and identification in species level would be useful