بهينه سازي روش اشعه دهي Uv جهت تخريب Dna اسپرماتوزواي تاسماهي سيبري (Acipenser Baerii) در مطالعات گاينوژنزيز: سنجش كامت

Optimization of UV radiation method for DNA degradation of Siberian sturgeon (Acipenser baerii) spermatozoa in gynogenesis studies: Comet assay

القاي گاينوژنزيز (ماده زايي) به اسپرماتوزوا با dna تخريب شده همزمان با تحرك بالا نياز دارد. در اين مطالعه براي بدست آوري اين قابليت در اسپرماتوزواي تاسماهي سيبري از اشعه uv با دوز 4257 ژول بر متر مربع استفاده شد. ابتدا مايع سمينال با استفاده از سانتريفيوژ از اسپرماتوزوا جدا شد و سپس اسپرم 10 درصد تهيه و تحت تابش اشعه uv در زمان هاي 30، 60، 90، 120 و 150 ثانيه قرار گرفت تا بهترين ميزان تحرك و درصد تخريب dna با استفاده از روش سنجش دنباله (comet assay) در مقايسه با شاهد بدست آيد. همزمان قابليت لقاح اين اسپرم ها در تخمك تاسماهي استرلياد و ميزان لارو تفريخ شده آن آزمايش گرديد. بر اساس نتايج بدست آمده بهترين مدت زمان اشعه دهي به اسپرماتوزوا 90 ثانيه تعيين شد كه در اين مدت، ميزان تخريب dna دنباله 1.96 ± 32.27 درصد، ميزان تحرك اسپرم اشعه داده 50 درصد با حركت رو به جلو، ميزان لقاح 0.52 ± 52.1 درصد و ميزان تفريخ تخم 0.11 ± 1.1 درصد بدست آمد. بنابراين اسپرم تاسماهي سيبري غيرفعال شده ژنتيكي مي تواند در مطالعات گاينوژنزيز بين گونه اي در تاسماهيان با هدف توليد نتاج تمام ماده و به منظور حفاظت از انقراض آنها استفاده شود.

Induction of gynogenesis requires the spermatozoa with degraded DNA with high motility, simultaneously. In this study, to obtain this capability in Siberian sturgeon spermatozoa, UV radiation with a dose of 4257 j/m2 was applied. First, the seminal fluid was separated from the spermatozoa using a centrifuge, and then 10% of the sperm was prepared and irradiated with UV radiation for 30, 60, 90, 120, and 150 seconds to obtain the best motility and percentage of DNA damage using the comet assay method in comparison with the control. Simultaneously, the fertilization ability of these sperms was tested in sterlet sturgeon eggs and the rate of hatched larvae. Based on the results, the best duration of irradiation of spermatozoa was determined to as 90 seconds. The DNA degradation rate was 32.27±1.96 percent, the motility rate was 50% with forwarding movement, the fertilization rate was 52.1±0.52 percent, and the egg hatching rate was 1.1±0.11 percent. Therefore, genetically inactivated Siberian sturgeon sperm could be used in interspecific gynogenesis studies in sturgeon. Either to producing offspring of all females or to protect their extinction.