ايجاد مقاومت به ويروس Y سيب زميني (PVY) با استفاده از سازه سنجاق سري حاوي ژن پروتئين پوششي

Induction of Resistance to Potato Virus Y (PVY) Using Hairpin Construct of Coat Protein

يكي از بيماري هاي مهمي كه سالانه خسارت هاي اقتصادي بسياري به كشاورزان كشور وارد مي كند و باعث افت عملكرد و كيفيت محصول مي شود، ويروس Y سيب زميني (PVY) است. امروزه استفاده از سازوكار هاي ايجاد مقاومت ناشي از پاتوژن افق هاي جديدي در راستاي توليد گياهان تراريخت مقاوم به ويروس گشوده است. در اين پژوهش از روش خاموشي ژن براي ايجاد مقاومت بر عليه PVY استفاده شده است. براي اين منظور از يك سازه ژني RNAi برگرفته از بخش پروتيين پوششي (CP) ژنوم PVY استفاده شد. سازه با استفاده از اگروباكتريوم به ريزنمونه هاي ميانگره و برگ گياه سيب زميني انتقال داده شد. درصد نوساقه هاي توليد شده در محيط انتخابي حاوي علفكش فسفينوتريسين پس از رشد و تكثير مورد ارزيابي قرار گرفت. تراريختي بوته ها و بررسي بيان ژن در گياهان تراريخته با استفاده از آزمون زنجيره اي پليمراز (PCR) و RT-PCR بررسي شد. بر اساس نتايج 42 درصد گياهان باززا شده تراريخته بودند. بيان ژن CP نيز در اغلب لاين ها به اثبات رسيد. به منظور تعيين مقاومت گياهان تراريخته در برابر آلودگي PVY، آزمون زيست سنجي صورت گرفت. نتايج حاصله نشان داد كه حدود 82 درصد گياهان سيب زميني تراريخت نسبت به آلودگي PVY مقاوم هستند.

Potato virus Y (PVY) is one of the most damaging viruses of potato plants which infects most cultivars and causes a significant decrease in yield products quality and also economical losses annually. Recently, the application of pathogen derived resistance mechanisms has opened new horizons for the development of virus-resistant transgenic plants. This research was carried out to study RNA silencing to engineered potato plants that are resistant to potato virus Y (PVY). RNAi construct was designed from coat protein (CP) segment of PVY. Potato explants were transformed by Agrobacterium tumefaciens AGL1 with pCAMRNAiCP containing bar selectable gene. The rate of regenerated plants was evaluated in the selected medium containing the herbicide phosphinotricin after growth and propagation. Transgenic plants and their gene expression were investigated using polymerase chain reaction (PCR) and RT-PCR. Results showed that 42 percent of regenerated plants were transformed. The expression of CP hairpin construct was determined by RT-PCR analysis in most of the lines. PVY resistance bioassay showed that 82 percent of transgenic potato plants were resistance to PVY.