رديابي و شناسايي Candidatus phytoplasma trifolii از درختان سيب در ايران

چكيده در بازديدهاي بهار و تابستان سال 1397 از باغات درختان سيب در استان خراسان رضوي، علائم مشكوك به بيماري فيتوپلاسمايي مانند زردي، ريزبرگي، و همچنين برگ هايي كه گوشوارك در آن به طور غيرعادي كشيده شده بود در سطح باغات مشاهده شد و 33 نمونه از برگ درختان جمع آوري گرديد. با استفاده از آغازگرهاي عمومي P1 / P7 و آغازگرهاي آشيان ه اي R16F2n / R16R2، fU5 / rU3 و R16MF2 / R16MR2 در واكنش زنجيره اي پليمراز (PCR) از كليه نمونه هاي داراي علائم، قطعات 1800 جفت باز در PCR عمومي و در PCRهاي آشيان ه اي به ترتيب قطعات 1250، 876 و 1400 جفت باز تكثير شدند. در نتايج حاصله مشخص گرديد 18 نمونه آلوده به فيتوپلاسما مثبت بودند. محصول PCR دومرحله اي با جفت آغازگرهاي R16F2n / R16R2، همسانه سازي و تعيين ترادف شده و در بانك جهاني ژن ثبت گرديد. مقايسه توالي هاي به دست آمده با توالي هاي موجود در NCBI توسط نرم افزار BLAST و همچنين بررسي چند شكلي طولي قطعات برشي (RFLP) حقيقي با محصول PCR دومرحله اي با استفاده از آنزيم هاي AluI،  RsaIو Tru1I (MseI)، نشان داد كه فيتوپلاسماي همراه درختان سيب بيشترين شباهت را با Candidatus Phytoplasma trifolii مربوط به گروه افژولش شبدر (Clover proliferation group, 16SrVI) دارند. آناليز توالي ها با استفاده از نرم افزار iPhyClassifier، تعيين ميزان تشابه نوكلئوتيدي و آناليز تبارزايي با استفاده از ترادف كامل ژن RNA ريبوزومي 16S نيز تعلق فيتوپلاسماي همراه درختان سيب در استان خراسان رضوي را در گروه 16SrVIA تاييد كرد. اين اولين گزارش از سيب هاي آلوده به Ca. Phytoplasma trifolii در ايران و ساير نقاط جهان است.