اثر اسيد سيتريك بر توان زيستي و القاء آپوپتوز در رده سلولي آدنوكارسينوماي كولوركتال انسان (HT-29)

Effect of citric acid on Bioavailability and apoptosis induction in human colorectal Adenocarcinoma cell line (HT29)

زمينه و هدف آدنوكارسينوماي كولوركتال به علت پاسخ ضعيف مبتلايان به درمان هاي رايج، يكي از علل شايع مرگ و مير مي باشد. در اين مطالعه اثر اسيدسيتريك بر توان زيستي و ميزان وقوع آپوپتوز در رده سلولي آدنوكارسينوماي كولوركتال انسان (HT-29) بررسي شده است. اسيدسيتريك يك اسيد آلي طبيعي است كه عموما در عصاره ي مركبات يافت مي شود و به عنوان يك مهاركننده ي فيزيولوژيكي آنزيم هاي دخيل در مسير گليكوليز، در راستاي حذف سلول هاي سرطاني مورد توجه مي باشد. روش بررسي در اين مطالعه سلول هاي سرطاني كولوركتال رده ي HT-29 در محيط كشت DMEM با 10 درصد سرم جنين گاوي كشت داده شدند. سلول ها در غلظت هاي 400، 800 و 1600 ميكروگرم/ميلي ليتر اسيدسيتريك تيمار شدند و براي مدت زمان 24، 48 و 72 ساعت انكوبه گرديدند. ميزان رشد سلولي با روش رنگ سنجي MTS بررسي شد، ميزان القا آپوپتوز به وسيله ي دستگاه فلوسيتومتري با كيت آنكسين-پروپيديوم يديد (Annexin-PI) طبق دستورالعمل كيت در هر سه زمان انكوباسيون بررسي گرديد. يافته ها نتايج بررسي توان زيستي سلول هاي رده ي HT-29 تيمار شده با غلظت هاي مختلف اسيد سيتريك (400، 800 و 1600 ميكروگرم/ميلي ليتر)، بعد از گذشت زمان هاي سه گانه ي انكوباسيون (24، 48 و 72 ساعت) با استفاده از تست MTS حاكي از آن است كه توان زيستي سلول هاي رده ي HT-29 در تمام غلظت هاي اسيدسيتريك به صورت وابسته به دوز و زمان كاهش مي يابد. همچنين نتايج القاي آپوپتوز در رده سلولي HT-29 تيمار شده با غلظت هاي مختلف اسيدسيتريك (400، 800 و 1600 ميكروگرم/ميلي ليتر)، بعد از گذشت زمان هاي سه گانه ي انكوباسيون (24، 48 و 72 ساعت) با استفاده از تست Annexin V-FITC، نشان مي دهد كه درصد سلول هايي كه در مرحله ي ابتدايي و انتهايي آپوپتوز هستند با افزايش غلظت اسيدسيتريك و طول زمان انكوباسيون افزايش يافته اند، كه اين افزايش درصد آپوپتوز نيز نسبت به گروه كنترل در هر سه زمان 24، 48 و 72 ساعت قابل ملاحظه مي باشد. نتيجه گيري نتايج بيان مي كنند كه اسيدسيتريك قادر است از طريق القاي مسير آپوپتوزي توان زيستي سلول هاي آدنوكارسينوماي كولوركتال را كاهش دهد.

Background and Aim Colorectal adenocarcinoma is one of the common causes of death due to weak response to common therapies. In this study, the effect of citric acid on bioavailability and apoptosis of the human colorectal adenocarcinoma cell line (HT29) was examined. Citric acid is a naturally organic acid that commonly found in citrus and is considered as a physiological inhibitor of enzymes involved in glycolysis pathway to remove cancer cells. Materials and Methods In this study, HT-29 colorectal adenocarcinoma cancer cells were cultured in DMEM medium with 10% bovine serum. The cells were treated in 400, 800 and 1600 μg/ml concentrations of citric acid and incubated at 24, 48 and 72 hours respectively. Cell growth was analyzed by MTS kit and apoptosis was analyzed three times by flow- cytometry using an Annexin V-FITC/PI kit according to the manufacturers protocol. Results The results of bioavailability of treated HT-29 cells with different concentrations (400, 800 and 1600 μg/ml) of citric acid, after trinary incubation time (24, 48 and 72 hours) using the MTS assay showed that, bioavailability of HT-29 cell line decreased at all concentrations of citric acid in a time dependent manner. Also, the results of the apoptosis induction in treated HT-29 cell line with different concentrations (400, 800 and 1600 μg/ml) of citric acid, after trinary incubation time (24, 48 and 72 hours) using Annexin V-FITC/PI test showed that the percentage of the early and late apoptosis cells increased with increasing citric acid concentration and incubation time, which increased the percentage of apoptosis compared to the control group is significant in all three times of 24, 48 and 72 hours. Conclusion The results indicate that citric acid can reduce the bioavailability of colorectal adenocarcinoma cells by inducing apoptosis pathway.