تثبيت باكتري باسيلوس آلكاليتلوريس در بستر آگار به منظور توليد آنزيم آلفا-آميلاز

Immobilization of Bacillus alkalitelloris in agar for alpha-amylase enzyme production

با توجه به مصرف بالاي آنزيم آميلاز، استفاده از سويه‌هاي مولد آنزيم آميلاز و بهينه‌سازي شرايط توليد اين آنزيم روشي كارآمد در جهت توليد اين آنزيم است. با توجه به اين كه تا كنون ژن مربوط به آميلاز باسيلوس آلكاليتوريس شناسايي نشده است، دستيابي به شرايط پايدار توليد آنزيم توسط باكتري‌هاي مولد اين آنزيم ها توليد داراي اهميت است. يكي از روش هاي مورد توجه تثبيت باكتري ها در بسترهاي مناسب است به طوري كه قابليت توليد آنزيم توسط اين باكتري ها حفظ شود. در اين پژوهش ابتدا باكتري باسيلوس آلكاليتلوريس در محيط كشت LB براث حاوي نشاسته كشت داده شد. سپس باكتري در آگار تثبيت شده و ميزان آنزيم توليد شده با استفاده از روش DNS اندازه‌گيري شد. در نهايت ميزان توليد آنزيم هنگام استفاده مجدد از سلول هاي تثبيت شده در كشت هاي متوالي ارزيابي شد. طبق نتايج به دست آمده در مطالعه حاضر باكتري باسيلوس آلكاليتلوريس تثبيت شده در بستر آگار همچنان قادر است آنزيم آلفا-آميلاز را توليد نمايد. حداكثر ميزان توليد آلفا-آميلاز پس از 24 ساعت به دست آمد. علاوه براين باكتري تثبيت شده پس از 4 دفعه تعويض محيط كشت همچنان باقي مانده و قادر به توليد آنزيم آميلاز است به طوري كه تا 72 ساعت تغيير قابل توجهي در ميزان توليد آنزيم مشاهده نمي شود. با توجه به اينكه تثبيت باكتري باسيلوس آلكاليتلوريس در آگار منجر به حفظ قابليت توليد آنزيم آلفا-آميلاز مي‌گردد، لذا مي‌توان از اين روش در توليد انبوه آنزيم آميلاز استفاده نمود.

Due to the high consumption of amylase, the use of amylase-producing strains and optimizing the production conditions of this enzyme is an efficient way to produce this enzyme. Due to the fact that the amylase gene of Bacillus alkalitelluris has not been identified so far, it is important to achieve stable enzyme production conditions by the bacteria that produce these enzymes. One of the most important methods is to immobilization of the bacteria in suitable support so that the ability of these bacteria to produce enzymes is maintained. In this study, Bacillus alkalitelluris was first cultured in LB broth culture medium containing starch. The bacteria were then immobolized on agar and the amount of enzyme produced was measured using the DNS method. Finally, the amount of enzyme production when re-use stabilized cells in successive cultures was evaluated. According to the results, the bacterium Bacillus alkalitelluris immobilized in agar support is still able to produce alpha-amylase enzyme. Maximum alpha-amylase production was obtained after 24 hours. In addition, the immobilized bacteria remain after 4 times of changing the culture medium and are able to produce amylase enzyme so that up to 72 hours no significant change in enzyme production is observed. Due to the fact that the immobilized of Bacillus alkalitelluris in agar leads to the maintenance of alpha-amylase production capacity, so this method can be used in mass production of amylase enzyme.