اوﻟﯿﻦ ﮔﺰارش رﺧﺪاد وﯾﺮوس ﺷﮑﺴﺖ رﻧﮓ ﮔﻞ ﺷﻤﻌﺪاﻧﯽ PFBV از اﯾﺮان و ﺗﻌﯿﯿﻦ ﺑﺮﺧﯽ وﯾﮋﮔﯽﻫﺎي ﻣﻮﻟﮑﻮﻟﯽ آن

First report of Pelargonium flower break virus (PFBV) in Iran and determining some of its molecular properties

شمعداني (Pelargonium spp.)از جايگاه مهمي در صنعت گل و گياه جهان برخوردار بوده و يكي از محبوب‌‌ترين گياهان براي استفاده داخل و خارج از خانه است. بيماري‌‌هاي ويروسي نقش مهمي در كاهش كمي و كيفي اين گياه زينتي دارند. در اين بررسي 72 نمونه مشكوك به آلودگي ويروسي با نشانه‌هايي مانند لكه‌‌هاي روشن حلقوي، سوخته و زرد روي برگ و شكستگي رنگ گلبرگ و همچنين گياهان بدون نشانه از گلخانه‌‌هاي مختلف منطقه‌‌ محلات و ورامين جمع‌‌آوري شدند. RNA نمونه‌‌‌‌هاي جمع‌‌آوري شده استخراج و در آزمون RT-PCR مورد ارزيابي قرار گرفتند. با استفاده از آغازگرهاي عمومي تيره Tombusviridae، يك قطعه DNA با اندازه 500 جفت باز (bp) از 21 نمونه تكثير شد. با تعيين توالي قطعه ياد­شده در دو جدايه ويروس و مقايسه با توالي‌‌هاي موجود در پايگاه داده‌‌هاي GenBank، وابستگي جدايه‌‌هاي ياد­شده به گونه Pelargonium flower break virus (PFBV) يا ويروس شكست رنگ شمعداني آشكار شد. دوباره آزمون RT-PCR با استفاده از جفت آغازگر اختصاصي Ch1/Ch2 تكثير كننده قطعه‌‌اي به طول bp1500 از قسمت انتهاي 3' ژنوم PFBV شامل ژن پروتئين پوششي (coat protein, CP) روي نمونه‌‌هاي مورد بررسي انجام گرفت كه درستي نتايج مرحله قبل را تاييد كرد. قطعه تكثير شده سه جدايه برگزيده، از ژل استخراج و به­طور­مستقيم تعيين توالي شدند. واكاوي فيلوژنتيك براساس توالي آمينواسيدي ژن CP جدايه‌‌هاي برگزيده انجام شد و درختواره فيلوژني با استفاده از روش neighbor joining رسم گرديد. نتايج بررسي­هاي تبارزايي نشان داد كه جدايه هاي PFBV گزارش شده از كشورهاي مختلف در دو گروه قرار مي‌‌گيرند و سه جدايه PFBV ايران در يك زير گروه و جدا از زير گروه‌‌هاي كشورهاي ديگر قرار گرفتند. اين نخستين گزارش از وجود PFBV از ايران مي باشد.

Geranium has an important place in the world flower and plant industry and is one of the most popular for indoor and outdoor use. Viral diseases play an important role in reducing the quantity and quality of this ornamental plant. In this study, 72 samples suspected of viral infection with symptoms such as bright ring spots, leaf necrosis and chlorosis, spots or color breaking on the petals, as well as asymptomatic plants were collected from various greenhouses in the Mahallat and Varamin and their suburbs. Total RNA was extracted and evaluated by RT-PCR using general primers of the family Tombusviridae. In 21 samples, a DNA fragment of 500 base pair (bp) in size was amplified using Tombusviridae primers. This DNA fragment from the two isolates were sequenced and compared with the sequences available in the Genbank database. The results indicated that both isolates belonged to Pelargonium flower break virus (PFBV). The RT-PCR test was performed again using a pair of specific primers (CH1/GH2) designed to amplify a 1500 bp DNA fragment from the 3' end of the PFBV virus genome containing the coat protein gene on the same samples, that confirmed the accuracy of the results of the previous step. The amplified DNA formed on the gel of three selected isolates was extracted from the gel and subjected to sequencing. Phylogenetic analysis was performed based on the amino acid sequence of CP gene and phylogenetic tree (genealogy) was drawn using neighbor joining method. The results of phylogenetic analysis showed that the reported PFBV isolates from different countries are in two groups and three PFBV isolates of Iran were placed separately in one subgroup from the subgroups of other countries. This is the first report of PFBV in Iran.