ارزيابي سوبستراهاي سلولي مورد استفاده در تحقيق و توليد فرآورده‌هاي بيولوژيك از نظر آلودگي به ويروس هاي BVD 1&2

Evaluation of cellular substrates used in research and production of biological products for infection with BVDV 1 & 2

همزمان با گسترش توليد واكسن بر روي محيط‌هاي كشت سلولي، شناسايي و از بين بردن ويروس‌هاي ناخواسته آلوده‌كننده محيط‌هاي كشت با منشاء حيواني، و همچنين پيشگيري از آلودگي فرآورده بيولوژيك ناشي ازمحيط‌هاي كشت سلولي به يكي از دغدغه‌هاي اصلي توليد‌كنندگان واكسن تبديل شده است. اين مطالعه با هدف بررسي آلودگي احتمالي سوبستراهاي سلولي مورد مصرف در تحقيق و توليد فراورده‌هاي بيولوژيك موسسه تحقيقات واكسن و سرم‌سازي رازي به ويروس‌هاي BVD1 و BVD2 انجام شد. در اين پژوهش از تعداد 44 لاين سلولي با شماره‌هاي پاساژ و تاريخ هاي ذخيره‌سازي مختلف در مجموع 100 نمونه مورد بررسي قرار گرفت. پس از استخراج RNA از سلول‌هاي فوق، ابتدا با استفاده از روش Real Time PCR و بكارگيري يك جفت پرايمر براي شناسايي تمامي Pestivirus، آزمايش غربالگري انجام شد. در اين آزمايش از بيوتايپ سايتوپاتيك NADL BVDV1a بعنوان كنترل مثبت استفاده شد. سپس به روش RT- PCR گونه و زيرگونه آن‌ها تعيين شد. آلودگي در پنج سلول Hek293, IBRS2(BA F/9), RBK, FLK, RK13 ديده شد كه همه سلول‌ها بجز IBRS2 در تايپينگ از نوع BVDV1b بودند. تمام سلول‌هاي مذكور در تحقيق و كنترل كيفي فراورده‌هاي بيولوژيك كاربرد دارند.

Simultaneously with the expansion of vaccine production on cell culture media, identification and elimination of adventitious viruses infecting culture media of animal origin, as well as prevention of contamination of biological products from cell culture media to one of the main concerns of production Vaccine suppliers. The aim of this study was to investigate the possible contamination of cellular substrates used in research and production of biological products of Razi Vaccine and Serum Research Institute with BVD1 and BVD2 viruses. The address of this investigate was 44 samples from 44 cell lines with different passage numbers and storage dates in a total of 100 samples. After extracting RNA from the above cells, a screening test was performed using Real Time PCR and a pair of primers to identify all Pestivirus. In this experiment, the cytopathic biotype BVDV1a NADL was used as a positive control. Then the species and their subspecies were determined by RT-PCR method. Infection was observed in five cells Hek293, IBRS2, RBK, FLK, RK13, all cells except IBRS2 in BVDV1b typing. All of these cells are used in research and quality control of biological products.