بهينه‌سازي توليد آلفا آميلاز با استفاده از باكتري باسيلوس سابتيليس PTCC 1720 در شرايط تخمير بستر جامد و خالص‌سازي جزئي آنزيم

مقدمه: آلفا آميلاز از پركاربردترين آميلازها در صنعت است. توليد آميلاز باكتريايي كم‌هزينه‌تر و آسان‌تر است. همچنين، روش تخمير در حالت جامد به‌دليل مزايايي همچون كاهش چشمگير هزينه‌ها و بازيافت مواد زائد سرشار از مواد مغذي يك روش كارآمد براي توليد آميلاز صنعتي است. بقاياي كشاورزي حاوي تركيبات مغذي مانند سبوس گندم، سوبسترا‌هاي اقتصادي‌تري براي تخمير در حالت جامدند. هدف اين پژوهش، بهينه‌سازي توليد آلفا آميلاز از باسيلوس سابتيليس با استفاده از سبوس گندم در شرايط تخمير در بستر جامد و تخليص جزئي اين آنزيم بود. مواد و روش‏‏ها: در اين مطالعه توليد آلفا آميلاز باسيلوس سابتيليس PTCC 1720 در شرايط تخمير بستر جامد بررسي و بهينه‌سازي شده است. تمامي پروتئين‌هاي توليدشده در شرايط بهينه با محلول اشباع آمونيوم سولفات 75 درصد رسوب‌دهي، جداسازي، تغليظ و دياليز شدند. فعاليت آلفا آميلاز با كمك معرف دي‌نيترو ساليسيليك‌اسيد (DNS) سنجيده شد. درصد خلوص با روش بردفورد و خلوص جزئي آنزيم با روش الكتروفورز ژل پلي‌اكريل‌آميد سديم دودسيل سولفات (SDSPAGE) مشخص شد. نتايج: توليد بهينه‌ آنزيم زماني حاصل شد كه10 گرم سبوس گندم با 15ميلي‌ليتر آب شهري مخلوط شد و با 3 ميلي‌ليتر از مايه تلقيح با جذب نوري 1 (CFU/mL 109) تلقيح و در دماي 37 درجه‌ سانتي‌گراد به مدت 72 ساعت گرماگذاري شد. فعاليت آلفا آميلاز بعد از رسوب‌دهي با آمونيوم سولفات 75 درصد،(U/mL)  563/3 بود و ميزان خلوص آنزيم 8/26 درصد محاسبه شد. وزن آنزيم تخليص‌شده نيز 63 كيلودالتون ارزيابي شد. بحث و نتيجه‏گيري: براساس يافته‌هاي اين تحقيق، تخمير بر بستر جامد با حضور باسيلوس مي‌تواند مسيري جديد و ارزشمند براي توليد آنزيم آميلاز فراهم كند.