بيان افتراقي ژن‌هاي HSP90 و AGO1 و AGO4 گوجه فرنگي در مواجهه با ويروس موزاييك خيار

Differential expression of HSP90 ,AGO1 and AGO4 genes in tomato infected by Cucumber mosaic virus

ويروس موزاييك خيار Cucumber mosaic virus (CMV) گونه شاخص جنس Cucumovirus از خانواده Bromoviridae است. در اين تحقيق بيان برخي ژن‌هاي مرتبط با رشد و نمو و متيلاسيون در يك رقم حساس گوجهفرنگي آلوده به ويروس موزاييك خيار بررسي شد. براي آلوده‌سازي گوجه‌فرنگي از همسانه‌هاي آلوده‌گر جدايه استاندارد Fny ويروس موزاييك خيار استفاده شد. بدين منظور پس از تهيه نسخه‌هاي رونويسي شده از همسانه‌هاي آلوده‌گر آران‌اي يك، دو و سه ويروس موزاييك خيار، رونوشت‌ها ابتدا روي توتون در مرحله چهاربرگي مايه‌زني شدند و پس از ظهور علائم و ايجاد آلودگي، عصاره گياه توتون آلوده به‌صورت مكانيكي روي گوجه فرنگي در مرحله چهاربرگي مايه‌زني شد. پس از بروز علائم در چندين مرحله از گياهان آلوده در فاصله‌هاي زماني 7، 14 و 21 روز پس از مايه‌زني، نمونهبرداري از برگ‌هاي آلوده انجام گرفت. پس از استخراج آران‌اي كل از گياهان داراي علائم حضور ويروس با استفاده از آغازگرهاي اختصاصي ويروس منطبق بر بخشي از ژن پروتئين پوششي تأييد شد. بيان برخي از ژن‌هاي مرتبط با دفاع و متيلاسيون مانند Hsp90، AGO1 وAGO4 توسط Real Time PCR اندازه‌گيري شد. نتايج نشان داد كه ميزان بيان برخي از ژن‌ها مانند HSP90 در گوجه‌فرنگي‌هاي آلوده كاهش يافته بود. همچنين بيان ژن AGO1، در روز هفتم و چهاردهم پس از آلودگي در مقايسه با گياه سالم افزايش يافت، در حالي‌كه در روز 21 پس از آلودگي ميزان بيان اين ژن نسبت به گياه سالم كاهش يافت. بيان AGO4 در گياهان آلوده به ويروس موزاييك خيار، در روز هفتم نسبت به گياه سالم كاهش اما در روز 14و 21 روز پس از آلودگي، افزايش بيان نشان داد. تغييرات بيان ژن در AGO احتمالاً مي‌تواند ناشي از تاخير در القاي اين ژن توسط ويروس در مرحله اول بروز علايم باشد.

Cucumber mosaic virus (CMV) is a type member of Cucumovirus genus in the family Bromoviridae. In this research, the expression profile of several genes related to development and methylation was tested in a sensitive variety of tomato infected by CMV-Fny. Tomato inoculation was carried out using a standard isolates of CMV (Fny). To this aim, transcripts of RNA1, RNA2 and RNA3 of CMV were transcribed and then, inoculated using sap inoculation on tobacco plants at the four-leaf stage. After symptoms induction, leaf samples were collected at 7, 14 and 21 days post inoculation (dpi). The virus infection was confirmed by RT-PCR using CMV-CP specific primers corresponding coat protein gene. The expression of several genes related to development and methylation including Hsp90, AGO1 and AGO4 was tested by real-time PCR. The results showed that the expression of HSP90 was decreased after infection by CMV compared to healthy plans. In addition, the expression of AGO1 was increased at 7 and 14 dpi whereas the expression was decreased compared to healthy plans at 21 dpi. The expression of AGO4 which has the role in plant defense was increased in infected tomato plants at 14 and 21 dpi and AGO4 expression was decreased compared to healthy plant in 7 dpi. It seems, changes in AGOs expression refer to late induction of plant resistance against the virus infection.