اثرات ضد التهابي و آنژيوژنزي زخم‌ پوش بر پايه كيتوزان/ سوپرناتانت عاري از سلول بيفيدوباكتريوم‌‌‌ بيفيدوم: مطالعه در رت

Anti-inflammatory and angiogenic effects of wound dressing based on Chitosan/Cell free supernatant of Bifidobacterium bifidum: A Rat model study

فرايند درمان زخم شامل مراحل يكپارچه و همپوشان است كه با مكانيسم‌هاي سلولي، همورال و ملكولي تنظيم مي‌شود. در اين مطالعه تاثير زخم‌پوش كيتوزان/ سوپرناتانت بيفيدوباكتريوم‌ بيفيدوم در درمان زخم بررسي شد. براي ساخت زخم‌پوش، بيفديوم‌باكتريوم بيفيديوم‌ در محيط MRSكشت شد و پس از گرماگذاري سوپرناتانت عاري از سلول آن با سانتريفوژ جدا و تعيين خصوصيت شد. سپس، % 37/5 محلول كيتوزان % 10 به سوپرناتانت افزوده شد و در قالب ريخته شد. براي بررسي بهبود زخم، 45 رت نر ويستار به 3 گروه، كنترل منفي بدون درمان، گروه فيلم كيتوزان و گروه با فيلم كيتوزان/سوپرناتانت تقسيم‌بندي شدند. زخم پوستي در پشت تمامي رت‌ها ايجاد شد و تيمار با زخم‌پوش منطبق انجام شد. در روزهاي 3،7،14 و21 پس از اندازه‌گيري ابعاد زخم، 3 رت از هر گروه كشته شد. فرايند بهبود زخم با بررسي هيستولوژي و ارزيابي بيان ژن‌هاي TNF-αو VEGFتعيين شد. نتايج نشان داد كه زخم‌پوش كيتوزان/سوپرناتانت پس از 14 روز سبب بسته شدن كامل زخم شده در حالي‌كه درصد بهبود در اين روز براي گروه‌هاي كنترل منفي و كيتوزان به ترتيب برابر %94/75 و %78/58 بودنتايج هيستولوژي نشان داد كه زخم‌پوش كيتوزان/سوپرناتانت سبب كاهش التهاب، افزايش اپيتليوم‌سازي مجدد و رسوب كلاژن و الاستين مي‌شود. همچنين، تيمار با اين زخم‌پوش با كاهش بيانTNF-α و افزايش بيان VEGF، روند بهبود زخم تسريع مي‌كند.

Wound healing is a complex process which regulates by cellular, humoral and molecular mechanisms. In this study we investigate the effects of wound dressing based on chitosan/cell free supernatant on wound healing. The B. bifidum was cultured in MRS broth and after incubation, cell free supernatant was separated and characterized for manufacturing of wound dressing. Then 37.5% of chitosan solution (10%) was added to supernatant and cast. For wound treatment investigation, 45 male wistar rats divided in 3 groups; control negative (without treatment), chitosan film group, and chitosan/supernatant film group. A full thickness wound was created on the back of the animals and treated with corresponding wound dressing. After direct measurement of wound diameter, 3 rats were sacrificed from each group on day 3, 7, 14 and 21. The wound healing process was identified by histological analysis and TNF-α and VEGF expression assay. Our results showed that the wound healing was completed after 14 days in Chitosan/ supernatant group. While this percentage in negative control and chitosan groups were 94.75 and 78.58%, respectively. Histological analysis showed that chitosan/Supernatant film reduced inflammation and enhanced re-epithelization and deposition of collagen and elastin. This treatment improved wound healing by down regulating of TNF-α and enhancement of VEGF expression.