تعيين جنسيت گوزن قرمز (زيرگونه مرال) با استفاده از تكنيك Duplex PCR به عنوان، روشي مناسب براي تخمين اندازه مؤثر جمعيت، جهت طراحي برنامه هاي حفاظت ژنتيكي آن در زيستگاه هاي كشور

Sex determination in Red deer (Ceruvus elaphus maral); suitable method for estimating the effective population size for genetic conservation programs in the country habitats

مقدمه: به علت اندازه كوچك جمعيت و ايزوله شدن گوزن قرمز زيرگونه مرال (Cervus elaphus) در منطقه حفاظت شده ارسباران-آينالو، مقدار هم خوني بالاست. كنترل جنسيت جهت حفظ اندازه­ مؤثر جمعيت در حد مناسب، امكان ايجاد هم خوني را كاهش مي دهد. هدف از تحقيق حاضر، دستيابي و بهينه سازي تكنيك تعيين جنسيت در گوزن مرال به عنوان روشي مناسب براي تخمين اندازه مؤثر جمعيت و حفاظت ژنتيكي آن در ارسباران و زيستگاه هاي كشور مي باشد. مواد و روش ها: در اين مطالعه نمونه خون از وريد وداجي و وريد دمي‌ گوزن ها به مقدار 5 سي سي در داخل‌ لوله‌هاي‌ حاوي‌ خلأ و EDTA تهيه و به‌ بانك ژن اداره كل حفاظت محيط زيست آذربايجان شرقي منتقل‌ گرديد. روش Duplex PCR بر طبق آغازگرهاي كروموزوم (Y) تعيين جنسيت منطبق با ژن DEAD-box Y-linked protein (DBY) جايگاه ريزماهوارك BMC1009 به عنوان كنترل داخلي تكثير شد. پس از دستيابي به شرايط بهينه تكنيك و تأييد جنسيت نمونه هاي با جنسيت معلوم از پيش تعيين شده، بار ديگر اقدام به جمع آوري مدفوع و استخراج DNA از نمونه هاي با جنسيت مجهول و تعيين جنسيت آن ها گرديد. نتايج: نتايج اين تحقيق با تكرارپذيري بالا، وجود دو باند 310-280 (ريزماهوارك پلي مورف) و 180 جفت باز (bp) در گوزن هاي نر و 310-280 (ريزماهوارك پلي مورف) جفت باز (bp) در گوزن هاي ماده را نشان داد. نتيجه گيري و بحث: نتايج ژنوتايپينگ نشان داد كه تعداد 8 ماده و 15 نر شناسايي شد و شاخص اندازه مؤثر جمعيت (4) محاسبه گرديد.

Unfortunately, due to the small population size and isolation of red deer (Cervus elaphus) in protected area-Arasbaran-Aynalu, there are inbreeding and the highly rate of bottleneck. Sex controlling for sex maintain effective population size as appropriate, may reduce inbreeding. For this purpose the objective of this study was access and optimization techniques for Sex determination in Red deer(Ceruvus elaphus); suitable method for estimating the effective population size for genetic conservation programs in Arasbaran and the country habitats. For this purpose, bleeding in deer, taken from jugular vein and tail vein after anesthesia, blood samples in tubes containing EDTA vaccum with ice -40c to the gen bank of Department of East Azerbaijan was transferred. Duplex PCR using primers based on the chromosome (Y) in accordance with the sex-determining gene DEAD-box Y-linked protein (DBY) simultaneously used with BMC1009 locus were amplified as an internal control per each reaction. The results are reliable, there are two bands 280-310 (polymorphic band) and 180 base pairs (bp) in male deer and 280-310 (polymorphic band) base pairs (bp) in female deer showed. To confirm this, residual PCR products was applied for sequencing. Genotyping results showed that 8 females and 15 males were identified as indicators of effective population size 4, respectively.