اثر تمايزي عصاره هيدرو الكلي ريشه گياه زرشك زرافشان بر سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي مشتق از بافت چربي رت نر نژاد ويستار

Effect of differentiation of hydroalcoholic extract of berberis integrrima root on mesenchymal stem cells derived from adipose tissue of male Wistar rats

هدف: در مطالعه حاضر اثرات عصاره هيدرو الكلي ريشه گياه زرشك زرافشان بر القاي تمايز سلول‌هاي بنيادي مزانشمي مشتق از بافت چربي رت نر نژاد ويستار به سمت استئوبلاست بررسي شد. مواد و روش ها: در اين مطالعه سلول‌هاي بنيادي مشتق از بافت رت نر نژاد ويستار جدا شد و براي تاييد بنيادي بودن ماركرهاي سطحي به روش فلوسايتومتري انجام شد و سلول‌هاي بنيادي با غلظت‌هاي 10، 20 ، 40 و 80 ميكروگرم بر ميلي‌ليتر عصاره هيدرو الكلي ريشه گياه زرشك زرافشان تيمار شدند. سميت سلول عصاره مذكور به روش MTT و اثرات تمايزي آن با رنگ‌آميزي اليزارين قرمز، سنجش فعاليت آنزيم آلكالين فسفاتاز و سنجش ميزان رسوب كلسيم بررسي شد. نتايج با استفاده از آزمون واريانس يكطرفه در سطح معني‌داري 05/0p< بررسي شد. نتايج: ماركرها بنيادي شامل CD105،CD44، CD73 در اين سلول‌ها بيان مثبت داشتند، و نسبت به ماركرهاي سطحي CD45 وCD34 بيان منفي داشتند. نتايج حاصل از آزمون MTT نشان داد غلظت هاي كمتر از 20 ميكروگرم بر ميلي ليتر اثرات سمي قابل توجهي بر سلول ها ندارند. فعاليت آلكالين فسفاتازي بالاتر در گروه تيمار نسبت به گروه كنترل در روز 10 مشاهده شد. نتايج حاصل از رنگآميزي آليزارين قرمز و سنجش ميزان كلسيم در مدت21 روز نشان داد كه اين عصاره به صورت وابسته به غلظت منجر به تمايز سلول‌هاي بنيادي به استئوبلاست مي‌شد. نتيجه گيري: يافته‌هاي اين پژوهش نشان داد سلول‌هاي بنيادي مزانشيمي مشتق از بافت چربي رت نر نژاد ويستار تيمارشده با عصاره هيدروالكلي ريشه گياه زرشك زرافشان در مسير تمايز به استئوبلاست وارد مي‌شوند.

Aim: In the present study, the effects of hydroalcoholic extract of Berberis integrrima root on the induction of differentiation in mesenchymal stem cells derived from adipose tissue of male Wistar rats towards osteoblasts were investigated. Material and Methods: In this study, stem cells derived from male Wistar rat tissue were isolated and flow cytometry was performed to confirm the surface markers. Stem cells were treated with 10, 20, 40 and 80 μg/ml hydroalcoholic extract of B. integrrima root. The cell toxicity of the extract was evaluated by MTT assay and its differentiated effects was evaluated by alizarin red staining and alkaline phosphatase activity, calcium deposition assay. Results were analyzed using one-way ANOVA at a significance level of P <0.05. Results: Stem cells markers including CD105, CD44, and CD73 had positive, and CD45 and CD34 had negative expression in these cells. The results of the MTT assay showed Concentrations less than 20 μg/ml do not have significant toxic effects on cells. Higher alkaline phosphatase activity was observed in the treatment group compared to the control group on day 10. The results of Alizarin red staining and measurement of calcium content for 21days showed that this extract in a concentration dependent manner leads to the differentiation of stem cells into osteoblasts. Conclusion: The findings of this study showed that mesenchymal stem cells derived from adipose tissue of male Wistar rats treated with hydroalcoholic extract of Berberis integrrima root enter osteoblasts in the differentiation pathway.