تشخيص كوپروآنتي ژن‌هاي فاسيولا با استفاده از آنتي‌بادي‌هاي پلي كلونال توليد شده بر عليه آنتي‌ژن دفعي ترشحي فاسيولا هپاتيكا و فاسيولا ژيگانتيكا

Detection of Fasciola Coproantigens Using Polyclonal Antibodies Produced Against Fasciola hepatica and Fasciola gigantica Secretory Excretory Antigens

روش‌هاي پارازيتولوژيك جهت تشخيص فاسيوليازيس داراي محدوديت‌هايي از جمله؛ دفع متناوب تخم انگل، طولاني بودن مرحله حضور تخم انگل در مدفوع مي‌باشند. هم‌چنين روش‌هاي سرولوژي بر پايه شناسايي آنتي‌ بادي‌هاي ضدانگل، قادر به تشخيص عفونت‌هاي گذشته از عفونت‌هاي جديد نيستند، لذا تشخيص كوپرو آنتي‌ژن‌هاي انگل در مقايسه با ساير روش‌هاي تشخيصي قابل اعتمادتر مي‌باشند. بنابراين هدف از اين مطالعه تعيين و تشخيص كوپروآنتي ژن‌هاي فاسيولا با استفاده از آنتي‌بادي‌هاي پلي‌كلونال توليد شده بر عليه آنتي‌ژن دفعي ترشحي فاسيولا هپاتيكا و فاسيولا ژيگانتيكا بود. روش بررسي: در اين مطالعه تجربي كه در سال 1396ـ 1395 انجام شد، كرم‌هاي بالغ فاسيولا از كبد دام‌هاي آلوده جمع‌آوري شدند و با روش مولكولي هضم آنزيمي تعيين گونه شدند. آنتي‌ژن دفعي‌ـ ترشحي از هر دو گونه فاسيولا تهيه گرديد. به منظور توليد آنتي‌بادي پلي كلونال 2 خرگوش براي هر آنتي‌ژن ايميونيز شدند. آنتي‌باديIgG توليد شده با روش كروماتوگرافي ميل تركيبي تخليص و با آنزيم پراكسيداز كونژوگه گرديدند. كوپروآنتي‌ژن‌ها از 99 نمونه مدفوع دامي شامل؛ 30 نمونه آلوده به فاسيولا، 39 نمونه مبتلا به ساير بيماري‌هاي انگلي و30 نمونه سالم تهيه گرديدند. در اين مطالعه 2 سيستم ساندويچ اليزا با استفاده از آنتي‌بادي‌هاي پلي كلونال توليد شده جهت شناسايي كوپرو آنتي‌ژن فاسيولا طراحي و ارزيابي شدند. ويژگي‌هاي آماري تست‌ها با استفاده از نرم‌افزار مديكال كلكلتور 3، 4، 16 محاسبه گرديدند. ضريب كاپا و بررسي هم‌خواني بين تست‌هاي ساندويچ اليزا محاسبه شد. يافته‌ها: تست ساندويچ اليزا با استفاده از آنتي‌بادي‌هاي پلي‌كلونال توليد شده بر عليه آنتي‌ژن دفعي‌ـ ترشحي فاسيولا هپاتيكا و فاسيولا ژيگانتيكا به ترتيب حساسيت و ويژگي 67/96، 86/89 درصد و 67/96، 3/91 درصد را نشان دادند. هم‌چنين توافق بالايي) 9/0< ضريب كاپا) بين آنتي‌باديي‌هاي پلي كلونال توليد شده بر عليه هر دو گونه فاسيولا جهت تشخيص فاسيوليازيس مشاهده گرديد. نتيجه‌گيري: در مجموع يافته‌ها نشان دادند كه آنتي بادي‌هاي پلي‌كلونال توليد شده بر عليه آنتي‌ژن‌دفعي ـ ترشحي هر دو گونه فاسيولا داراي كارايي مناسبي جهت شناسايي كوپرو آنتي‌ژن‌هاي فاسيولا و تشخيص فاسيوليازيس مي‌باشن

Parasitological methods for diagnosing fascioliasis have limitations such as; Intermittent excretion of parasite eggs is the long stage of presence of parasite eggs in the feces. Also, serological methods based on the detection of antiparasitic antibodies are not able to distinguish past infections from new infections, so the detection of parasitic co-antigens is more reliable than other diagnostic methods. Therefore, the aim of the present study was to determine and detect Fasciola coproantigens using polyclonal antibodies produced against Fasciola hepatica and Fasciola gigantica secretory excretory antigens. Methods: In the present experimental study conducted in 2016-2017, adult Fasciola worms were collected from the livers of infected animals and species were determined by molecular method of enzymatic digestion. Excretory-secretory antigen was prepared from both Fasciola species. In order to produce polyclonal antibodies, 2 rabbits were immunized for each antigen. IgG antibodies produced were purified by affinity chromatography and conjugated with peroxidase enzyme. Coproantigens from 99 animal fecal samples included; 30 samples infected with Fasciola, 39 samples with other parasitic diseases and 30 healthy samples were prepared. In the present study, two ELISA sandwich systems were designed and evaluated using polyclonal antibodies produced to identify Fasciola co-antigen. Statistical characteristics of the tests were calculated using Medical Collector 16.4.3 software. Kappa coefficient and consistency check between ELISA sandwich tests were calculated using SPSS software version 20. Results: Sandwich ELISA test using polyclonal antibodies produced against Fasciola hepatica and Fasciola gigantica secretory antigens showed 96.67%, 89.86% and 96.67% and 91.3%, respectively. Moreover, a high agreement (kappa coefficient <0.9) was observed between polyclonal antibodies produced against both Fasciola species for the diagnosis of fascioliasis. Conclusion: Overall, the findings indicated that polyclonal antibodies produced against excretory-secretory antigens of both Fasciola species have good efficacy for detection of Fasciola co-antigens and diagnosis of fascioliasis.