بيان موقت و خالص‌سازي پروتئين پروكيموزين در گياه توتون با استفاده از وكتور ويروسي

هدف: هدف از اين تحقيق همسانه‌سازي و بيان پروتئين نوتركيب كيموزين و پروكيموزين در گياه توتون با استفاده از ناقل ويروس موزائيك تنباكو و خالص‌سازي پروتئين توليد شده بود.  مواد و روش‌ها: توالي پروكيموزين بزي از پايگاه داده NCBI دريافت و براساس ترجيح كدوني گياه توتون بهينه‌سازي گرديد. سپس با طراحي آغازگرهاي مختلف ژن پروكيموزين و كيموزين تكثير و در ناقل‌هاي دوتايي (باينري) و ويروسي همسانه‌سازي و به باكتري آگروباكتريوم تومه‌فاشينس انتقال داده شد. با روش آگرواينفيلتراسيون باكتري حامل ناقل‌هاي دوتايي و ويروسي به برگ‌هاي گياه توتون تزريق گرديد. روش وسترن بلاتينگ به منظور بررسي بيان پروتئين مورد استفاده قرار گرفت. فعاليت نسبي پروتئين‌ها در تشكيل لخته مورد بررسي قرار گرفت.  نتايج: زماني كه ژن پروكيموزين با استفاده از ناقل‌هاي دوتايي در گياه توتون بيان گرديد، فقط يك باند ضعيف در پروتئين كل استخراج شده مشاهده گرديد، ولي زماني كه ژن كيموزين در ناقل دوتايي بيان گرديد، در پروتئين محلول نيز باند مشاهده گرديد. استفاده از ناقل‌هاي ويروسي باعث نكروزه شدن برگ‌هاي گياه توتون گرديد و نتايج مشابهي نيز با ناقل‌هاي دوتايي بدست آمد به طوري كه زماني كه ژن پروكيموزين بيان گرديد فقط يك باند در پروتئين كل، ولي زماني كه كيموزين بيان گرديد علاوه بر پروتئين كل در پروتئين محلول استخراج شده نيز باند مشاهده گرديد. بيشترين ميزان بيان با استفاده از سازه ژني TMVαchymosinhyFC بدست آمد كه پروتئين خالص شده داراي فعاليت تشكيل لخته U 8/16 در هر گرم برگ تر بود. نتيجه گيري: اگرچه استفاده از ناقل‌هاي ويروسي و بيان موقت مي‌تواند روش ارزان، سريع و موثري براي توليد پروتئين‌هاي نوتركيب باشد ولي در تحقيق حاضر نكروزه شدن و مشكلات احتمالي گياه توتون با كل يا بخشي از ژن پروكيموزين باعث كاهش سطح بيان كيموزين گرديد، كه تعيين دلايل احتمالي و راه‌هاي رفع آن‌ها  نيازمند مطالعات بيشتر مي‌باشد.