بررسي ميزان بيان ژن هاي KI67 و P53 در كشت هم‌جوار سلول‌هاي اپيتليوم كولونHT-29 با IL-17A

The Study of Expression of KI67 and P53 in Co-Culturing of Colon Epithelial Cell Line HT-29 with IL-17A

زمينه سرطان كولون از سرطان هاي رايج در جهان مي‌باشد. نقش IL-17A در سرطان از مراحل اوليه تومورزايي شروع مي شود و به نظر مي‌رسد با ايجاد التهاب نقش مهمي در تومورزايي دارد. هدف از مطالعه حاضر بررسي ميزان بيان ژن هاي KI67 و P53 در سلول‌هاي اپيتليوم كولونHT-29 تيمار شده با IL-17A مي باشد. روش كار IL-17A خريداري شد و به ميزان 50 ng/ml ، به محيط كشت HT-29، اضافه شد و پس از 24 ساعت سلول ها از محيط كشت جدا شد و نكروز سلولي با MTT بررسي گرديد. سپس استخراج RNA صورت گرفت و ميزان بيان P53 و KI67، با استفاده از پرايمر هاي جديد طراحي شده از روش Reverse transcription (RT) qPCR انجام و با نرم افزار GeniX6، مورد آناليز قرار گرفت. يافته ها آزمايش MTT نشان داد كه غلظت 150 ng/mlبيشترين كشندگي طي 24 ساعت را دارد. پس از 24 ساعت انكوباسيون با IL-17A ، ميزان بيان ژنهاي KI67 (P=0.003) و P53 (P=0.001) در سلولهاي HT-29در گروه تيمار شده با IL-17A بترتيب، كاهش و افزايش يافت. همچنين تعداد سلول هاي مورد بررسي (HT-29)در گروه تحت تيمار نسبت به گروه كنترل كاهش معني داري را نشان داد(P < 0.05). نتيجه گيري نتايج حاصل نشان داد IL17a مي تواند با افزايش بيان P53 و كاهش KI67 موجب جلوگيري از تكثير سلول هاي HT-29 در شرايط آزمايشگاهي شود. اين مي‌تواند زمينه براي استفاده از IL17a به عنوان عاملي براي ايمونوتراپي و پاتوژنز سرطان روده بزرگ باشد.

Colorectal cancer (CRC) is one of the most common cancers in the world. The role of IL-17A in cancer begins in the early stages of tumorigenesis and appears to play an important role in tumorigenesis by causing inflammation. The present study was conducted to investigate the expression of KI67 and P53 genes in HT-29 colon epithelial cells with IL-17A. Materials and Methods: IL-17A was purchased and 50 ng/ml was added to HT-29 culture medium and after 24 hours the cells were isolated from the culture medium and cell necrosis was examined by MTT. Then RNA was extracted and the expression levels of P53 and KI67 were analyzed using newly designed primers by Reverse transcription (RT) qPCR method and GeniX6 software. Results: The MTT test showed that a concentration of 150 ng/ml for 24 hours had maximal necrosis rate in HT-29. After 24 hours of IL-17A incubation, the expression of KI67 (P = 0.003) and P53 (P = 0.001) genes in HT-29 cells in the IL-17A exposed group decreased and increased, respectively. Also, compared to the control group the number of examined HT-29 cells in the IL-17A treated group showed a significant decrease (P <0.05). Conclusion: The results showed that IL-17A could inhibit HT-29 cell proliferation in vitro by increasing P53 expression and decreasing KI67. This could be a reason for further application of IL17a as a factor for immunotherapy and pathogenesis of the CRC.