ژنوتايپينگ باكتري گونه هاي باكتري بروسلا جدا شده از نمونه هاي بيماران مشكوك به تب مالت با تكنيك PCR-RFLPدر تهران 1399-1396

Genotyping of Brucella bacteria isolated from samples of patients suspected of brucellosis by technique PCR-RFLP in Tehran)2017-2020(

سابقه و هدف: بروسلوز يكي از مهمترين بيماري هاي زئونوز مي باشد. در بسياري از كشور هاي جهان از جمله ايران ، از نظر بهداشتي و اقتصادي بسيار حائز اهميت است.. در اين مطالعه ، ژنوتايپينگ گونه هاي باكتري بروسلا جدا شده از نمونه هاي بيماران مشكوك به تب مالت به وسيله تكنيك RFLP PCR در تهران مورد بررسي قرار گرفت. مواد و روش ها:از مجموع 453نمونه خون مشكوك به بروسلوز بيماراني كه از سال 96تا99به آزمايشگاه هاي تهران مراجعه كرده بودند، در محيط هاي كشت كاستاندا تلقيح گرديد و در دماي 37 درجه سانتيگراد به مدت 21 روز نگهداري شد. از كلني هايي كه در سطح محيط رشد كرده بودند DNA استخراج شد. ژن omp2a بروسلا به روش PCR با استفاده از پرايمر اختصاصي تكثير گرديد. .محصولات PCR ، با آنزيم محدود كننده Pst1 ، هضم و الگو هاي RFLP حاصل مورد تجزيه و تحليل قرار گرفت. يافته ها: از كل نمونه ها،در 10 مورد كلني رشد كرد كه تست هاي افتراقي جهت جداسازي گونه ها انجام شد.به روش PCR از نظر بروسلا تاييد شد و در آزمايش RFLP ،در 8 نمونه گونه بروسلا ملي تنسيس و در 2 نمونه گونه بروسلا آبورتوس تشخيص داده شد. بحث :در كشور ما بيماري بروسلوز وجود دارد و همچنان موارد ابتلا در برخي از روستاها مشاهده مي شود و در بين اين موارد ،گونه بروسلا ملي تنسيس نيز فراواني بيشتري نسبت به ساير گونه ها دارد . نتيجه گيري : با روش هاي مولكولي به راحتي ، در كمترين زمان ممكن ، دقت و حساسيت بالا و با خطركمتر ، مي توان وجود بيماري و گونه هاي مختلف بروسلا را تشخيص داد.

Aim and Background: Brucellosis is one of the most important diseases of zoonosis and is very important in many countries, including Iran, from a health and economic point of view. In this study, the Genotyping of Brucella bacteria isolated from samples of patients suspected of brucellosis was evaluated by PCR RFLP in Tehran. Material and methods: Out of 453 Blood samples suspected of brucellosis of patients who had referred to laboratories in Tehran were inoculated in Castanida culture media and stored at 37 ° C for 21 days. DNA was extracted from colonies that had grown on the surface. Brucella omp2a gene was amplified by PCR using a specific primer. PCR products were analyzed with Pst1 restriction enzyme, digestion and RFLP patterns. Results: Out of the total samples, it grew in 10 colonies and was confirmed by Brucella by PCR method. In RFLP test, in 8 specimens, Brucella melitensis and in 2 specimens, Brucella abortus were detected. Conclusion:There is brucellosis in our country,infections are also observed in some villages,and among these cases, Brucella melitensis is more common than other species and with the help of molecular methods, in the shortest possible time, high accuracy and sensitivity and with less risk, the presence of different diseases and species of Brucella can be detected.