عنوان مقاله :
كلونينگ آنزيم آلفا گالاكتوزيداز با هدف تبديل آنتي‌ژن B گروه خوني به آنتي‌ژن O
پديد آورندگان :
حداد ديلمي ، افسانه دانشگاه آزاد اسلامي واحد تهران شمال - دانشكده علوم زيستي , صالحي ، ميترا دانشگاه آزاد اسلامي واحد تهران شمال - دانشكده علـوم زيستي , شهابي ، مجيد مؤسسه عالي آموزشي و پژوهشي طب انتقال خون - مركز تحقيقات انتقال خون
كليدواژه :
گروه خوني , گالاكتوزيداز , E.COLI
چكيده فارسي :
سابقه و هدف كمبود گروههاي خوني سيستم ABO يكي از مشكلات متداول مراكز انتقال خون در دنيا ميباشد. هم ز‌مان با پيشرفت علم مهندسي ژنتيك و تخليص پروتئينها، تبديل آنتيژنهاي A و B به آنتي‌ژن O و ايجاد گروه خوني واحد مطرح شد. هدف از اين پژوهش، بيان ژن آلفا گالاكتوزيداز در ميزبان پروكاريوتي E.coli با ايجاد تغييرات پس از ترجمه و در نهايت تبديل آنتي‌ژن B گروه خوني به آنتي‌ژن O بود. مواد و روش‌ها در اين مطالعه تجربي، ژن آلفا گالاكتوزيداز دانه قهوه كه پس از بهينه‌سازي كدونها در پلاسميد pBHA حاوي جايگاه برش آنزيم‌هاي BamH1 و Nco1 كلون شده بود، در باكتري E.coli سويه TOP10 تكثير و استخراج شد. ژن آلفا گالاكتوزيداز پس از برش با آنزيم‌هاي فوق و تخليص روي ژل آگاروز مجدداً در پلاسميد بياني pET-20b كلون شده و به باكتري E.coli سويه rosetta 2 (DE3) وارد شد. بيان ژن با استفاده از القاكننده IPTG انجام شد. وجود پروتئين توليدي با استفاده از SDS-PAGE و وسترن بلات بررسي شد. آزمون عملكرد پروتئين نيز با توانايي تبديل گلبولهاي B به O ارزيابي شد. يافته‌ها وسترن بلات و SDS-PAGE وجود پروتئين در پري پلاسم باكتري را تائيد كرد. آنزيم تخليص شده توانست آنتي‌ژن B را به طور نسبي از گلبول قرمز حذف كرده و ميزان آگلوتيناسيون با آنتيسرم B را به ميزان زيادي كاهش دهد. نتيجه گيري بيان پروتئين يوكاريوتي در ميزبان پروكاريوتي ميتواند در توليد انبوه آنزيم گالاكتوزيداز براي كاربرد در مراكز انتقال خون كارگشا باشد. بهينه‌سازي شرايط مختلف بيان براي دستيابي به مقادير كافي از آنزيم ضروري ميباشد.
