ارزيابي اثرات siRNA بر سطح بيان ژن Snail1 و miR143 در سلول‫هاي متاستاتيك سرطان سينه‬‬‬‬‬

هدف: در دهه‌هاي گذشته تلاش هاي زيادي با هدف جستجوي ابزارهاي جديد جهت درمان سرطان صورت گرفته است. در اين راستا، كشف، بررسي و كاربرد تكنيك‫هاي مرتبط با RNA هاي مداخله‌گر كوچك (siRNA) يكي از قابل توجه‌ترين پيشرفت‪ها در زمينه شناسايي و درمان سرطان  بوده است. RNA  مداخله گر كوچك كه گاهي به‏‏عنوان RNA مداخله گر كوتاه يا RNA خاموش كننده نيز شناخته مي‌شود، معمولا 21 جفت باز طول دارد و با تجزيه mRNA پس از رونويسي، با بيان ژن‌هاي خاص با توالي‌هاي نوكلئوتيدي مكمل تداخل مي‌كند و از ترجمه جلوگيري مي‌كند. مطالعات بسياري نشان داده‌اند كه siRNA ها بر تنظيم بيان برخي ژن‌ها كه در سرطان‌ها نقش دارند تاثيرگذار مي‌باشند. siRNA ها بر فاكتورهاي رونويسي  Snailكه در تهاجم و متاستاز سلول‌هاي سرطاني و miR143 كه در پاتوژنز سرطان‌ها نقش مهمي دارند موثر هستند. miRNA‌ ها همراه با عوامل رونويسي مي‌توانند مسيرهاي بيولوژيكي دخيل در سرطان‌زايي را مختل ‌كنند. حال آنكه ، اثر دقيق ها siRNA بر بيان ژن‌هاي snail1 و miRNA143 در سلول‌هاي سرطاني سينه كاملا روشن نيست. بر اين اساس مطالعه حاضر به بررسي اثراتsiRNA  بر snail1 و miRNA143  بر سلول‌هاي سرطان سينه پرداخته است. مواد و روشها: در اين تحقيق تجربيآزمايشگاهي سلول‌هاي سرطاني سينه رده MDAMB468 انستيتو پاستور ايران خريداري شدند. سلول‌ها در محيط كشت RPMI1640 حاوي 10% FBS كشت داده شدند. جهت تيمار سلول‌هاي سرطاني با siRNA  اختصاصي، كيت ژن  Snail1(Santacruz biotechnology California, USA) مورد استفاده قرار گرفت. سلول‌ها به دو گروه كنترل (عدم تيمار) و سلول‌هاي تيمار شده (ترانسفكت شده با siRNA) تقسيم‌بندي شدند. به‌منظور مشخص كردن زمان موثر، سلول ها تحت تاثير دوز 60پيكومول  siRNA به‌مدت 24، 48 و 72 ساعت قرار گرفتند. پس از بررسي بيان ژن و به‌دست آمدن زمان موثر در ادامه به‌منظور به‌دست آوردن دوز موثر سلول‌ها با سه دوز 40، 60 و 80 پيكومول تيمار شدند. از ژن بتا اكتين به‌عنوان ژن كنترل داخلي استفاده شد. مورفولوژي سلول‌هاي متاستاتيك MDAMB468 با استفاده از ميكروسكوپ نوري قبل و بعد از ترانسفكت ژن اختصاصي مورد بررسي قرار گرفتند. تكثير سلول‌ها با رنگ آميزي تريپان بلو بررسي شد. سطح بيان ژن snail1 و miR143 توسط qRTPCR ارزيابي شد. داده‌ها با استفاده از آزمون تي – تست تجزيه و تحليل شدند. نتايج: در اين مطالعه در سلول‌هاي سرطاني سينه رده MDAMB468 سطح نسبي بيان ژن Snail1 در زمان موثر 48 ساعت و در مواجهه با دوز موثر 60 پيكومول دچار كاهش معني‌داري شد (P 0.0001). اما ناك داون ژن Snail1 توسط siRNA اختصاصي در سلول‌هاي سرطاني رده  MDAMB468درمواجهه با دوز موثر60 پيكومول و زمان موثر 48 ساعت سبب افزايش سطح بيان نسبي ژن miR143 در مقايسه با گروه كنترل شد (P 0.0001). همچنين ميزان رشد سلول‌هاي سرطاني  MDAMB468با ناك داون ژن Snail1 كاهش پيدا كرد. نتيجه گيري: نتايج حاصل از اين پژوهش نشان دادند كه ترانسفكت سلول‌هاي سرطان سينه رده MDAMB468 توسط siRNA اختصاصي با اثرات كاهشي و افزايشي كه بر سطح بيان ژن Snail1 و ژن miR143  داشته است مي‌تواند به‌طور موفقيت آميزي سبب كاهش تكثير و تهاجم سلول‌هاي سرطان سينه مي‌شود.