كلون سازي و بيان ژن هماگلوتينين ويروس آنفولانزا H9N2 در سلول Sf9

سابقه و هدف: ويروس آنفولانزا يكي از مهمترين عوامل مرگ و مير طيور بر اثر بيماريهاي تنفسي است كه ساليانه خسارات زيادي را به صنعت پرورش طيور در سراسردنيا وارد مي‌كند. پروتين هماگلوتينين (HA)  از عوامل اصلي در بيماري‌زايي اين ويروس است لذا هدف از پژوهش حاضر كلون كردن و بيان اين ژن در سلول Sf9 با استفاده از باكولوويروس مي‌باشد.مواد و روشها: بعد از جداسازي ژنوم ويروس آنفولانزا H9N2، ژنHA  توسط پرايمرهاي اختصاصي  با روشهايRT-PCR  و PCR تكثير و با كمك وكتورpFastBac Dual  به بكميد منتقل گرديد. بكميد نوتركيب واجد ژن HA به سلول ميزبانDH10Bac انتقال داده شد. با ترانسفكت كردن سلولSf9  با بكميد نوتركيب، چگونگي بيان و ميزان بيان پروتين نوتركيب با روشهاي SDS-PAGE، western blotting و بردفورد بررسي شد. يافته ها: پروتين حاصل از بكميد نوتركيب با استفاده ازSDS PAGE بررسي و خلوص آن تائيد شد. غلظت پروتين نوتركيب در محلول رويي سلولهايSf9  آلوده به ويروس نوتركيب µg/ml 138 تخمين و توسطwestern blotting تائيد شد.نتيجه گيري: در تحقيق حاضر ژن HA بر روي وكتورPfastBacDual  با موفقيت كلون شد و بعد از انتقال بر روي بكميد و ترانسفكت به سلولSf9  بيان مناسبي از ژن در محلول رويي سلولهاي Sf9 بدست آمد. با انجام آزمايش هاي حيواني، اين پروتين ميتواند به عنوان واكسن نوتركيب بر عليه آنفولانزا H9N2 مورد استفاده قرار گيرد.