طراحي و كلونينگ ژن L1 بهينه شده ويروس پاپيلوما انساني تيپ 18 در وكتور بياني pcDNA3 و ارزيابي بيان آن در سيستم يوكاريوتي

زمينه: واكسن‌ها نقش ويژه‌اي در مهار و كاهش ميزان مرگ ومير ناشي از بيماري هاي عفوني داشته‌اند. در اين راستا DNA واكسن ها با هدف سهولت توليد و كاهش خطرات ناشي از واكسن هاي سنتي ايجاد شده اند. ويروس پاپيلوماي انساني (HPV) به عنوان عامل ايجاد كننده سرطان دهانه رحم معرفي شده است. در اين راستا پروتئين كپسيد ويروس (L1) به منظور ايجاد واكسن هاي زير واحدي و نيز DNA واكسن مورد استفاده قرار گرفته است. هدف از اين پژوهش تجربي طراحي و ساخت سازواره بياني ژن L1 ويروس HPV 18 و بررسي بيان آن در سلول‌هاي يوكاريوتي مي باشد. مواد و روش‌ها: در اين مطالعه تجربي، ژن L1 ويروس HPV 18 پس از بهينه سازي و سنتز، در وكتور بياني pcDNA 3.1 hygro ساب كلون گرديد. تأئيد كلونينگ با استفاده از آزمون colony PCR و واكنش هضم آنزيمي انجام شد. انتقال وكتور بياني به سلول هاي HEK293 با استفاده از واكنشگر Turbofect انجام شد. پس از 72 ساعت، RNA كل از سلول هاي ترانسفكت شده و سلول هاي كنترل استخراج شده و cDNA ساخته شد. بررسي بيان ژن در سطح mRNA در سلول ها با انجام PCR بر روي cDNA انجام شد. يافته‌ها: نتايج نشان داد كه بدنبال بهينه سازي توالي ژن L1، شاخص هاي CAI و Fop در سطح ايده آل افزايش يافت. كلونينگ ژن بهينه شده HPV 18-L1 در وكتور بياني pcDNA3 با استفاده از آزمون كلوني PCR و واكنش هضم آنزيمي با موفقيت تأييد گرديد و نتايج بيانگر تشكيل پلاسميد نوتركيب pCDNA3.1-L1 است. متعاقباً بررسي بيان ژن L1 در سطح mRNA نشان دهنده بيان موفقيت آميز ژن L1 در سيستم يوكاريوتي مي باشد. نتيجه‌گيري: نتايج حاصل از اين تحقيق، كارايي وكتور بياني ايجاد شده در بيان مؤثر ژن L1 در شرايط in vitro را نشان مي دهد. اين وكتور بياني قابليت استفاده به عنوان DNA واكسن در مطالعات آينده در شرايط in vivo را دارا مي‌باشد.