طراحي گام ‌به‌گام وكتورهاي محبوب و شايع در دست‌ورزي ژنتيكي با استفاده از سيستم CRISPR/Cas9

زمينه و هدف: ويرايش ژنوم روشي كارآمد و دقيق در مطالعات بيولوژيكي و پزشكي است. در ميان طيف وسيعي از تكنيك‌هاي ويرايش ژنوم، تكرارهاي كوتاه پاليندرومي بافاصله منظم خوشه‌اي (CRISPR) يكي از ساده‌ترين روش‌ها و درعين‌حال بسيار اميدواركننده است. سيستم CRISPR از دو جزء كليدي تشكيل شده است. يك آنزيم اندونوكلئاز به نام Cas9 و يك هدايت‌كننده RNA (gRNA) كه اطمينان حاصل مي­كند كه آنزيم Cas9 نقطه مناسبي از ژنوم را برش مي­دهد. اگرچه ويرايش ژنوم بر پايه CRISPR يكي از روش‌هاي مفيد براي اصلاح ژنوم است؛ اما هنوز چالش‌هاي متعددي در مراحل اين تكنيك وجود دارد. مواد و روش‌ها: RNA هاي راهنما بر اساس مكان هدف و وكتور موردنظر طراحي و سفارش داده شدند. مراحل كلونينگ انجام شد و با تعيين توالي، به‌عنوان يك روش استاندارد طلايي تأييد شدند. فهرستي از RNA هاي راهنما كارآمد براي ژن LAMP-2 بر اساس پايگاه‌هاي داده برجسته موجود و با تجزيه‌وتحليل و مقايسه اختصاصيت و عملكرد به‌عنوان دو ويژگي اصلي فراهم شد.  يافته‌ها: در اين مطالعه سعي شده است تا چالش‌هاي اصلي در فرايند تهيه وكتورهاي محبوب (pX330/pX459) سيستم CRISPR/Cas9 بررسي شوند. همچنين فهرستي از RNA هاي راهنما كارآمد براي يك ژن اتوفاژي نيز به‌عنوان‌ مثال براي روشن شدن روش‌هاي طراحي RNA راهنما فراهم آمده است. نتيجه‌گيري: در اين مقاله سعي شده است تا مشكلاتي كه احتمال مي‌رود در طول طراحي RNA راهنما و آماده‌سازي پلاسميد به وجود آيد، به تصوير كشيده شوند و به دنبال آن توصيه‌هاي مناسب براي حل آن‌ها ارائه شود.