نقش سرين 310 در فعاليت آنزيمي و پروفايل دمايي كاسپاز-9 انساني

زمينه و هدف: كاسپاز-9 يك آنزيم كليدي در مسير داخلي آپوپتوز است كه فعاليت آن با سازوكارهاي مختلفي مانند فسفريلاسيون تنظيم مي شود. گزارش شده است كه فسفريلاسيون سرين 310 در كاسپاز-9 موشي مانع پردازش آنزيم مي شود. نقش اين باقيمانده ي آمينواسيدي در فعاليت آنزيمي كاسپاز-9 انساني نامشخص است. در اين پژوهش اثر ايجاد بار منفي روي سرين 310 در فعاليت آنزيمي كاسپاز-9 انساني مورد بررسي قرار گرفت. مواد و روش ها: با توجه به اينكه فسفريلاسيون منجر به ايجاد بار منفي در كاسپاز-9 مي شود، كدون سرين 310 در كاسپاز-9 انساني به كدون آسپارتات با استفاده از روش جهش زايي هدفمند Quick change جهش داده شد. كاسپاز-9 نوتركيب وحشي و جهش يافته در سويه باكتري BL21(DE3) بيان و با استفاده از كروماتوگرافي گرايشي تخليص شدند. پروفايل دمايي و فعاليت كاسپاز-9 جهش يافته در مقايسه با آنزيم وحشي به كمك سوبستراي كروموژنيك Ac-LEHD-pNA در شرايط برون تني سنجش شد. تجزيه و تحليل آماري داده ها با آزمون t انجام شد. يافته‌ها: نتايج نشان داد كه پارامترهاي سينتيكي كاسپاز-9 جهش يافته ي S310D و آنزيم وحشي مشابه هستند؛ اما پروفايل دمايي آن‌ها متفاوت است. آنزيم جهش يافته ي S310D در دماي 37 درجه ي سانتي گراد فعاليت بيشتر و در دماهاي 4، 15، 45 و 60 درجه ي سانتي گراد فعاليت كمتري در مقايسه با آنزيم وحشي داشت. نتيجه‌گيري: ايجاد بار منفي بر روي سرين 310 در كاسپاز-9 بدون تأثير بر پارامترهاي سينتيكي سبب تغيير در پروفايل دمايي آنزيم مي شود.