استخراج و تخليص لاكتوفرين از شير شتر و بررسي فعاليت آميلازي آن

سابقه و هدف: لاكتوفرين در ترشحات موكوسي، شير و كلستروم يافت مي‌شود و داراي فعاليت‌هاي ضدميكروبي، جذب آهن و افزايش پاسخ‌هاي ايمني مي‌باشد. لاكتوفرين قابليت تجزيه نشاسته و ATP را داراست. هدف از اين مطالعه، بررسي حفظ فعاليت آنزيمي لاكتوفرين شيرشتر پس از خالص سازي توسط كروماتوگرافي تبادل يوني بود. مواد و روش‌ها: در اين تحقيق آزمايشگاهي پس از گرفتن شير شتر، چربي و كازئين حذف و لاكتوفرين توسط كروماتوگرافي تبادل يوني با استفاده از CMSephadexC50 خالص گرديد. مقادير Km و Vmax فعاليت آميلازي لاكتوفرين، pH و دماي بهينه واكنش مشخص شد. بدين منظور از محلول 5/0 درصد نشاسته ذرت به‌عنوان سوبسترا و از آزمايش فعاليت يدي براي تعيين مقادير مصرف نشده استفاده شد. دماي بهينه فعاليت آميلازي توسط كروماتوگرافي كاغذي تعيين شد. يافته‌ها: نتايج حاصل از بررسي، حضور لاكتوفرين را در محدوده 73كيلودالتون و غلظت آن را به‌طور متوسط micro;g/ml60 نشان داد. مقادير Km و Vmax به ترتيب mg.ml12 وmg.ml1.min1 0/2 تعيين شد. همچنين لاكتوفرين فعاليت آميلازي گسترده اي در محدوده pH هاي 4 تا 7 داشت و بيش ترين فعاليت را در بpH برابر 5 دارا بود. فعاليت آميلازي لاكتوفرين در دماي C˚40 به حداكثر مقدار خود رسيد. هضم آنزيمي سبب هيدروليز نشاسته و تبديل آن به قندهاي مالتوز و گلوكز شد. استنتاج: بر اساس يافته‌هاي مطالعه حاضر روش كروماتوگرافي تبادل يوني مي‌تواند سبب جداسازي لاكتوفرين با خلوص بالا گردد. فعاليت آميلازي بالاي لاكتوفرين نشان داد كه ساختار پروتئيني آن پس از عبور از ستون كروماتوگرافي حفظ شده است.