بررسي مولكولي كوي هرپس ويروس (Koi Herpesvirus) در تلفات مزارع پرورشي ماهيان گرمابي استان خوزستان

هرپس ويروس نوع 3 (CyHV-3)، عامل اصلي بيماري واگيردار كوي هرپس ويروس (KHVD) در ماهي كپور معمولي و كوي در سرتاسر جهان است. بدين منظور از 60 قطعه ماهي كپور معمولي از مزارع تلفات دار و مزارع استان خوزستان كه در چند سال اخير تلفات گزارش كرده بودند، طي سال‌هاي 1400-1396، جهت رديابي بيماري ويروس هرپس كوي به روش مولكولي نمونه برداري شد. جهت افزايش بار ويروس در بافت‌‌هاي آبشش و كليه، به ازاي سه ماهي، سه نمونه آبشش و سه نمونه كليه به صورت جداگانه با يكديگر مخلوط شدند. استخراج DNA بافت با استفاده از كيت تجاري شركت رهازيست پادتن طبق دستورالعمل كيت انجام شد. سپس آزمايش واكنش زنجيره‌‌اي پلي‌‌مراز آشيانه‌‌اي با استفاده از مسترميكس Amplicon و پرايمرهاي مربوط به ژن پلي‌‌مراز انجام شد. نتايج حاصل از Nested PCR نشان داد كه 3 نمونه (دو نمونه آبشش و يك نمونه بافت كليه) از 40 نمونه مخلوط شده مورد آزمايش داراي باند 339 كيلوجفت باز بودند و به عنوان نمونه مثبت در نظر گرفته شدند. تعيين توالي محصولات PCR و آناليز اوليه Blast نشان داد كه توالي يكي از نمونه‌‌هاي مثبت به توالي‌‌هاي مربوط به CyHV-3 شباهت داشت. نتايج هم‌ترازي رديف‌‌هاي نوكلئوتيدي و درخت فيلوژني اين توالي، كوي هرپس ويروس را با قطعيت تشخيص داده و با شماره دسترسي LC713276 در بانك ژن جهاني ثبت گرديد.   [1] Raha‌‌‌‌ Zist Padtan [2] Nested PCR