توليد داروي نوتركيب آسپاراژيناز باكتري E.coli در مقياس آزمايشگاهي

مقدمه: L-asparaginase آنزيم دارويي برگرفته شده از باكتري اشرشياكلي مي‌باشد و يكي از داروهايي است كه در درمان سرطان خون حاد لنفوبلاستيك به كار مي‌رود. كاهش آسپاراژين خون بعد از استفاده از آنزيم آسپاراژيناز مي‌تواند مرگ را براي اين سلول‌ها به دنبال داشته باشد. هدف از اين طرح، بررسي امكان توليد و تخليص آنزيم آسپاراژيناز مي‌باشد. روش‌ها: ژن آنزيم آسپاراژيناز موجود در ژنوم باكتري اشرشياكلي با استفاده از تكنيك PCR تكثير شد. پس از تخليص، ژن فوق در وكتور pET28a كلون و به ميزبان باكتري انتقال داده شد. پس از ترانسفورماسيون، شرايط مختلف بيان پروتئين جهت بهينه‌سازي بررسي گرديد. بيان آنزيم نوتركيب به كمك SDS-PAGE و وسترن بلات تأييد شد. سپس آنزيم آسپاراژيناز با روش كروماتوگرافي تمايلي و با كمك ستون حاوي رزين Ni-NTA و روش هيبريد خالص شد و در نهايت فعاليت آنزيمي آن بررسي گرديد. يافته‌ها: بيشترين ميزان توليد آنزيم آسپاراژيناز در باكتري در دماي 37 درجه‌ي سانتي‌گراد، غلظت 1 ميلي‌مولار از القاگر و زمان 20 ساعت پس از القاء بود. آنزيم آسپاراژيناز نامحلول با استفاده از ستون نيكل خالص شده و روي ستون فرايند تاخوردگي مجدد (Refolding) انجام شد. با توجه به فعاليت آنزيم ريفولد شده در تست فعاليت آنزيمي مي‌توان نتيجه گرفت فرايند تاخوردگي مجدد آنزيم به درستي انجام شده است. نتيجه‌گيري: به دليل اهميت زياد توليد آنزيم آسپاراژيناز در ايران و نياز گروهي از بيماران براي استفاده از اين آنزيم، در اين پروژه با بهينه كردن فرايند بيان و تخليص، آنزيم L-asparaginase در مقياس آزمايشگاهي توليد شد.