بيان دو سيستروني و پايدار فاكتور 9 انعقادي انساني و پروتئين فلورسنت سبز تقويت شده در سلول‌هاي تخمدان همستر چيني سازگار با كشت معلق

زمينه و هدف: درمان فعلي هموفيلي B درمان جايگزيني است كه شامل تزريق داخل وريدي فاكتور 9 انساني خالص شده از پلاسما يا فرم نوتركيب توليد شده در سلول‌هاي پستانداران است. در تحقيق حاضر با استفاده از يك سيستم بياني دو سيستروني، بيان پايدار فاكتور 9 انساني در ردۀ سلولي تخمدان همستر چيني سازگار با كشت معلق (CHO-s) و محيط عاري از سرم مورد بررسي قرار گرفت. مواد و روش ها: يك قطعه DNA متشكل از توالي هاي نوكلئوتيدي فاكتور 9 انساني، جايگاه مياني ورود ريبوزوم و پروتئين فلورسنت سبز تقويت شده در وكتور بياني pcDNA3.1 تحت كنترل پروموتر سايتومگالو ويروس همسانه سازي شد. پلاسميد دوسيستروني حاصل با استفاده از آنزيم برشگر BglII خطي و در سلول‌هاي CHO-s ترانسفكت شد. سلول‌هاي ترنسفكت شده به مدت 14 روز تحت تيمار با ماده جنتيسين قرار گرفتند. سپس محيط كشت سلول‌هاي پايدار جمع‌آوري و بيان فاكتور 9 با استفاده از وسترن بلاتينگ و الايزا بررسي شد. فعاليت انعقادي نيز با روش كروموژنيك مورد ارزيابي قرار گرفت. يافته ها: سلول هاي CHO-s نوتركيب و مقاوم به جنتيسين، زير ميكروسكوپ فلورسنت به رنگ سبز مشاهده شدند كه حاكي از بيان و تجمع پروتئين فلورسنت سبز تقويت شده در سيتوپلاسم سلول‌ها بود. نتايج حاصل از وسترن بلاتينگ، بيان و ترشح فاكتور 9 نوتركيب به داخل محيط كشت را تائيد كرد. مقدار فاكتور 9 ترشح شده ng/mL/10^6 150 و فعاليت انعقادي آن mU/mL 0/2 ± 5/6 محاسبه شد. نتيجه‌گيري: يافته هاي ما نشان داد كه اين سيستم بياني دو سيستروني توانايي توليد هم‌زمان پروتئين فلورسنت سبز تقويت شده و فاكتور 9 انساني را در سلول‌هاي CHO-s دارد. اين سامانه بياني، فرايند انتخاب و جداسازي سلول‌هاي بيان كننده فاكتور 9 را تسهيل مي‌كند.