كلونينگ، بيان ژن و خالص سازي كربوكسي پپتيداز جديد از گونه هالوفيل Bacillus persicus درياچه فوق شور آران و بيدگل

پروتئازهاي ميكروبي به دليل كاربرد گسترده در صنايع شوينده، دارويي و فرآوري خوراك دام درصد بالايي از كل بازار آنزيم هاي صنعتي را به خود اختصاص مي دهند. گونه‌هاي جنس Bacillus، قابليت بالايي در توليد و ترشح مقادير بالاي آنزيم پروتئاز را دارند كه از فعاليت هاي فيزيولوژيك آن ها نشات مي گيرد. در اين مطالعه، ابتدا ژن كد كننده كربوكسي پپتيداز از گونه Bacillus persicus به وسيله PCR و با استفاده از آغازگرهاي داراي جايگاه‌هاي برش NdeI و XhoI جدا شد. پس از هضم آنزيمي محصول PCR، قطعه ژن در بين جايگاه‌هاي مورد نظر در حامل بياني pET28a+ كلون شد و پلاسميد نوتركيب به داخل سويه بياني E. coli BL21(DE3) ترانسفورم شد. پلاسميدهايي كه Colony PCR آنها مثبت بود جهت تاييد نهايي براي تعيين توالي ارسال شد. بيان آنزيم نوتركيب تحت شرايط دمايي و در زمان‌هاي مختلف انجام شد و تخليص پروتئين مورد نظر از طريق كروماتوگرافي تمايلي نيكل آگارز صورت پذيرفت. بيشترين سطح بيان در غلظت 0/4 ميلي‌مولار IPTG در دماي 32 درجه سانتي‌گراد و مدت زمان 20 ساعت انكوباسيون تعيين شد. وزن مولكولي پروتئين نوتركيب كربوكسي پپتيداز حدود 58 كيلودالتون بود. با توجه به مقدار بالاي بيان پروتئين محلول و بهينه‌سازي آسان بيان و خالص‌سازي آن در شرايط آزمايشگاهي، چنانچه فعاليت آنزيمي در حضور سوبستراهاي استاندارد به مقدار مناسب باشد و همچنين اگر مطالعات تكميلي امكان توليد بهينه و به صرفه مقدار بالايي از اين آنزيم را در حجم بالا و شرايط نيمه صنعتي نشان دهد، مي‌توان اميدوار بود كه اين آنزيم گزينه مناسبي براي توليد نيمه صنعتي باشد.