بررسي مقايسه‌اي شرايط طبيعي و واسرشته در محلول‌سازي و تخليص پروتئين نوتركيب لكتين نوع سي توكسوكارا كنيس

زمينه مطالعه: لكتين نوع سي توكسوكارا كنيس عامل اصلي تعديل سيستم ايمني و تحريك لنفوسيت‌‌هاي T تنظيمي در ميزبان مي‌باشد و باعث افزايش جمعيت سلول‌هاي(Forkhead box P3) Foxp3+ و كاهش التهاب مي‌شود و مي‌تواند به عنوان كانديداي دارويي در درمان بيماري‌‌هاي خودايمن معرفي شود.هدف: مقايسه تخليص پروتئين نوتركيب لكتين نوع سي توكسوكارا كنيس در دو شرايط واسرشته و طبيعي به منظور افزايش بازيابي و حفظ فعاليت زيستي آن مي‌باشد. روش‎كار: يك توالي به طول 660 جفت‌باز از لكتين نوع سي توكسوكارا كنيس در پلاسميد pET32-a سنتز و در باكتري اشريشيا كلي BL21(DE3) در دماي 37 درجه سانتي‌گراد به مدت 6 ساعت با ايزوپروپيل بتا-دي-۱-تيوگالاكتوپيرانوزيد (IPTG) 1 ميلي‌مولار القا و بيان شد. در مطالعه حاضر بافر ليز‌كننده اوره 8 مولار (pH=8) و بافر حاوي ايميدازول 01/0 مولار همراه با ليزوزيم 1 ميلي‌گرم/ميلي‌ليتر براي شكستن سلول‌هاي باكتريايي و محلول‌سازي پروتئين مورد استفاده قرار گرفت. بافرهاي فوق همراه با سونيكه كردن، به منظور شكستن سلول‌هاي باكتري استفاده شد و لام‌هاي ميكروسكوپي تهيه و با رنگ‌آميزي گرم بررسي شدند. پروتئين نوتركيب استخراج شده تحت شرايط واسرشته و طبيعي با استفاده از رزين نيكل-نيتريلوتري‌استيك‌اسيد آگاروز و رزين نيكل-نيتريلوتري‌استيك‌اسيد سفاروز تخليص شد. ارزيابي ايمونوژنيسيته پروتئين نوتركيب با روش دات‌بلات با سرم خرگوش چالش شده با پروتئين نوتركيب انجام شد.نتايج: بيشترين مقدار بيان پروتئين با وزن مولكولي 41 كيلودالتون در ساعت ششم پس از القا در دماي 37 درجه سانتي‌گراد با IPTG 1 ميلي‌مولار حاصل شد. بافر اوره 8 مولار (pH=8) حاوي ليزوزيم 1 ميلي‌گرم/ميلي‌ليتر همراه با سونيكه كردن، مقدار زيادي از پروتئين نوتركيب استخراج شد. تخليص پروتئين تحت شرايط واسرشته با استفاده از رزين نيكل- آگاروز مقدار پروتئين بيشتري نسبت به رزين نيكل سفاروز بازيابي شد. نتايج آزمايش دات‌بلات نيز حضور آنتي‌بادي IgG (Immunoglobulin G) اختصاصي عليه پروتئين نوتركيب لكتين نوع سي توكسوكارا كنيس در سرم خرگوش ايمن شده تا رقت 1:500 را مورد تأييد قرار داد.نتيجه گيري نهايي: استفاده از روش واسرشته بر فعاليت زيستي پروتئين تأثير منفي نداشت و با اين روش مقدار بيشتري پروتئين در سيستم باكتريايي بازيابي گرديد. پروتئين نوتركيب لكتين نوع سي توكسوكارا كنيس تخليص شده با اين روش مي‌تواند با اهداف مختلف مورد استفاده قرار گيرد.