توليد و خالص‌سازي آنتي‌بادي پلي كلونال عليه مولكول CD166 خرگوش

پيش‌زمينه و هدف: CD166 يك مولكول چسبنده لكوسيت فعال‌شده (ALCAM) است و به‌عنوان مولكول چسبنده سلول به سلول عمل مي‌كند. CD166 نقش مهمي در زنده ماندن، رشد و تهاجم سلول‌هاي سرطاني دارد. اين پژوهش به‌منظور تهيه آنتي‌بادي پلي كلونال عليه آنتي‌ژن CD166 طراحي گرديد. مواد و روش كار: پپتيد انتخاب‌شده از مولكول CD166 سنتز شده و پس از كانژوگه شدن با پروتئين KLH، در امولسيوني با ادجونت كامل فروند، به دو خرگوش ماده نيوزيلندي به‌صورت زير جلدي و در چند نوبت تزريق شد. سپس آنتي‌بادي‌هاي موجود در سرم خرگوش با روش FPLC تخليص شده و مقدار آن با روش اليزاي غيرمستقيم تعيين گرديد. با روش خالص‌سازي ژل سيانوژن-برومايد، آنتي‌بادي‌هاي اختصاصي بر ضد پپتيد CD166 متصل به KLH جداشده، و غلظت آنتي‌بادي توليدي عليه پپتيد يا پپتيد -KLH با روش الايزا تعيين گرديد. يافته‌ها: بعد از تزريق مكرر پپتيد CD166 متصل به KLH، آنتي‌بادي بر ضد پپتيد CD166 توليدشده ولي از تيتر پاييني برخوردار بود. بخش عمده‌اي از آنتي‌بادي توليدي عليه قسمت اتصال پپتيد–KLH ساخته شده بود. همچنين تمايل آنتي‌بادي‌هاي توليدي براي اتصال به پپتيد–KLH در مقايسه با پپتيد به‌تنهايي بيشتر بود. بحث و نتيجه‌گيري: آنتي‌بادي‌هاي توليدي، بيشتر بر ضد شاخص آنتي‌ژني پپتيد–KLH بود. سنتتيك و كوچك بودن پپتيد تزريق‌شده مي‌تواند دليلي براي كم بودن تيتر و ميل اتصال آنتي‌بادي به آن باشد.