مطالعه مولكولي و كلونينگ ژن dt كورينه باكتريوم در سلول مستعد براي تهيه واكسن

سابقه و هدف: كورينه باكتريوم ديفتريه باكتري هوازي، گرم مثبت و غير اسپورزا است. توكسين ديفتري (dt)، پروتئيني با سميت بسيار بالا بوده و در اثر آلودگي باكتري به كورينه فاژ خاصي كه حامل tox است، توليد مي‌شود. هدف از مطالعه حاضر، كلونينگ ژن dt كورينه باكتريوم در سلول مستعدE.coli XL1blue براي توليد پروتئين نوتركيب و استفاده از اين پروتئين در تحقيق‌هاي بعدي در سال 1401 در مؤسسه پژوهشي پاسارگارد بود.روش كار: در اين مطالعه مقطعي، يك نمونه DNA سويه واكسينال كورينه باكتريوم ديفتريه 8PW تحت سويه 2000CN از موسسه رازي تهران تهيه شد. براي شناسايي ژن dt، DNA سويه باكتري با استفاده از پرايمرهاي اختصاصي در روش واكنش زنجيره‌اي پليمر از   (PCR) تكثير يافت. با استفاده از كيت TA-كلونينگ ژن مذكور در سلول مستعد E.coli XL1blue  انجام شد. رسم درخت فيلوژني با استفاده از تعيين توالي ناحيه ژني srRNA  16 براي سويه باكتري استفاده شده با نرم‌‌افزارclustalX  و  Mega5  انجام شد.يافته‌ها: DNA سويه كورينه باكتريوم ديفتري حامل ژن dt بودند. انجام TA-كلونينگ ژن dt با روش‌هاي Real Time PCR، تعيين توالي محصول PCR، حضور كلني‌هاي سفيد آبي و تكثير با پرايمر M13  تأييد شد. نتيجه تعيين توالي ناحيه ژني SrRNA 16 تأييد‌كننده كورينه باكتريوم ديفتري بود.نتيجه‌گيري: در اين بررسي ژن dt  در وكتور E.coli XL1blue  كلون و سپس تأييد شد و در جهت آماده سازي براي ابزار پروتئين نوتركيب و همچنين به عنوان يك آنتي‌ژن قوي در تحريك سيستم ايمني مي تواند در نظر گرفته شود. اين ژن مي‌تواند در مطالعه‌هاي بعدي استفاده شود.