بيان، تخليص و ارزيابي ايمني‌ زايي پروتئين كايمر دربردارنده نواحي ايمونوژن از فلاژلين و اينتيمين عليه باكتري E.coli O157:H7

هدف: اشريشياكلي خونريزي‌دهنده روده‌اي (EHEC) و سروتيپ O157:H7 يكي از مهم‌ترين بيماري‌زاهاي عامل اسهال مي‌باشند. باكتري با توليد سم شبه شيگا باعث تخريب سلول‌هاي اپيتليال و در موارد حاد سندرم اورمي هموليتيك (HUS) مي‌شود. درمان آنتي‌بيوتيكي عليه اين عامل كارآمد نبوده بلكه باعث تشديد توليد سم شيگا مي‌شود. طراحي ايمونوژن‌هاي كايمر مي‌تواند يكي از راه‌بردهاي موثر عليه باكتري باشد. هدف از اين تحقيق، بررسي ايمني‌زايي آنتي‌ژن كايمر نوتركيب در بردارنده نواحي ايمونوژن از  پروتئين‌هاي فلاژلين و اينتيمين عليه باكتري E.coli O157:H7 بود. مواد و روش‌ها: بخش‌هاي ايمونوژن از پروتئين‌هاي فلاژلين و اينتيمين براي ارزيابي‌هاي بيوانفورماتيك انتخاب گرديد. پلاسميد نوتركيب pET28a- H7-Int به E.coli BL21 (DE3) منتقل شد. بيان پروتئين كايمر با IPTG  القا و نتايج با SDS-PAGE ارزيابي گرديد. پروتئين نوتركيب با استفاده از ستون كروماتوگرافي تمايلي Ni-NTA تخليص و با روش وسترن بلات تائيد شد. ايمني‌زايي در موش با پروتئين خالص انجام و تيتر آنتي‌بادي به روش ELISA تعيين گرديد. ريزش باكتري و مرگ‌ومير در موش‌ها مورد بررسي قرار گرفت. يافته‌ها: بيان پروتئين نوتركيب درميزبان E.coli منجر به توليد پروتئين H7-Int با وزن 70 كيلودالتون شد. ميزان پروتئين خالص شده براي هر ليتر از محيط 80 ميلي‌گرم بود. ايمني‌زايي موش‌ها با پروتئين نوتركيب، باعث القاي ايمني هومورال شد. متعاقب خوراندن باكتري زنده، ريزش باكتري در مدفوع موش‌هاي ايمن به طور معني‌داري (CFU/ml 102) كاهش يافت. 100 درصد و 80 درصد از موش‌هاي ايمن به ترتيب پس از تزريقLD50 10  و LD50100 از باكتري، زنده ماندند. نتيجه‌گيري: نتايج نشان داد، پروتئين كايمر ايمني محافظتي ‌را در موش‌ها ايجاد مي‌كند و مي‌تواند به ‌عنوان يك كانديد ايمونوژن عليه E.coli O157:H7 مورد بررسي قرار گيرد.